Vážená redakce,
V poslední době se tvrdí, že Ellmanova metoda nemá dostatečnou přesnost pro měření aktivit cholinesteráz (ChEs) (Komersová et al., 2007; Sinko et al., 2007; Pohanka et al., 2011; Dingova et al., 2014). Tato metoda byla poprvé představena a popsána Ellmanem a jeho spolupracovníky a je založena na hydrolýze derivátu thiocholinu (acetyl- nebo butyryl) ChEs (pravými nebo pseudo) a reakci vzniklého thiocholinu s thiolovým činidlem 5,5′-dithiobis-2-nitrobenzoovou kyselinou (DTNB) a vzniku aniontu 5-thio-2-nitrobenzoové kyseliny (TNB). Měřením absorpce iontu TNB při vlnové délce 410 nm pro pseudo-ChE a 440 nm pro retikulocytární acetyl-ChE se nepřímo určuje aktivita ChE (Ellman et al., 1961). Někteří autoři navrhli, že indoxylacetát je lepším substrátem než acetylthiocholin (ATCH), protože nereaguje s oximovými protilátkami a thiolem používaným pro Ellmanovu metodu (Pohanka et al., 2011). Navíc DTNB, který je nestabilní, interaguje s volnými sulfhydrylovými skupinami ve vzorku a může ovlivnit aktivitu cholinesterasy (Dingova et al., 2014). Jiní výzkumníci prokázali, že oximy reagují s ATCH (oximolýza), přičemž vzniká thiocholin a následně ion TNB (Sinko et al., 2007). Někteří autoři také uvádějí, že pokud je koncentrace DTNB mnohem vyšší než koncentrace ATCH, dochází ke snížení rychlosti hydrolýzy ATCH, což má za následek nižší naměřenou aktivitu ChE (Komersová et al., 2007).
Ačkoli výše uvedené problémy byly uvedeny ohledně Ellmanovy metody, každý z nich má své logické řešení. Za prvé, prostým vhodným zředěním vzorku se zředí i sloučeniny obsahující thioly a oximy ve vzorku, a tudíž se výrazně sníží rozsah reakce DTNB s těmito látkami (Mohammadi et al., 2017). Za druhé, molární útlumové koeficienty indoxylacetátu a TNB jsou 3900 M-1.cm-1 (Pohanka a kol., 2011), resp. 13600 M-1.cm-1 (Ellman a kol., 1961). Detekční limit pro měření aktivity ChE pomocí DTNB je tedy přibližně 3,5krát nižší než u indoxylacetátu. Za třetí, pro koncentrace DTNB 0,2-0,598 mM je nejlepší poměr koncentrací DTNB/ATCH 1,25-3,74, což vede k optimální rychlosti hydrolýzy ATCH ChE (Komersová a kol., 2007).
.