Souprava ELISA pro stanovení autoprotilátek proti 21-hydroxyláze (21-OH Ab) je určena pouze pro profesionální použití ke kvantitativnímu stanovení 21-OH Ab v lidském séru. Autoimunitní destrukce kůry nadledvin je nejčastější příčinou Addisonovy choroby a autoprotilátky proti specifickému steroidnímu enzymu 21-hydroxyláze jsou důležitými markery autoimunity nadledvin. Může tomu tak být v případě, že se onemocnění projevuje jako Addisonova choroba nebo jako součást autoimunitních polyglandulárních syndromů (APS) typu I nebo typu II.
V soupravě 21-OH Ab ELISA se 21-OH Ab v sérech pacientů, kalibrátorech a kontrolách nechají interagovat s 21-OH potaženými na jamkách destičky ELISA. Po 16-20hodinové inkubaci se vzorky vyloučí a 21-OH Ab se naváže na 21-OH potažené na jamkách. 21-OH-Biotin se přidá ve druhém inkubačním kroku, kdy se díky schopnosti 21-OH Ab působit divalentně vytvoří můstek mezi 21-OH imobilizovaným na destičce a 21-OHBiotinem. Množství navázaného 21-OH-Biotinu se pak stanoví ve třetím inkubačním kroku, který zahrnuje přidání streptavidinové peroxidázy (SA-POD), která se specificky váže na Biotin. Přebytečná, nenavázaná SA-POD se pak promyje a přidáním peroxidázového substrátu 3,3′,5,5′-tetrametylbenzidinu (TMB) se vytvoří modrá barva. Tato reakce se zastaví přidáním stop roztoku, což způsobí, že obsah jamky zežloutne. Absorbance žluté reakční směsi při 450 nm a 405 nm se poté odečte pomocí čtečky ELISA destiček. Vyšší absorbance ukazuje na přítomnost 21-OH Ab v testovaném vzorku. Čtení při 405 nm umožňuje kvantifikaci vysokých absorbancí. Doporučuje se, aby hodnoty nižší než 1 U/ml byly měřeny při 450 nm. Pokud je možné odečítat pouze při jedné vlnové délce, lze použít 405 nm. Interval měření je 0,3 – 100 U/ml (libovolné jednotky).
.