. 2AG spontánně izomeruje na svůj biologicky neaktivní analog 1-arachidonoylglycerol (1AG) acylovou migrací a od 1AG se odlišuje pouze chromatograficky. Matricové efekty způsobené především koextrahovanými fosfolipidy mohou dále zhoršit analýzu. Kromě toho jsou 2AG a 1AG za určitých podmínek, jako je odpařování rozpouštědla nebo rekonstituce sušených extraktů, nestabilní. Zkoumali jsme vliv různých organických rozpouštědel a jejich směsí, jako je toluen, ethylacetát a chloroform-methanol, na izomerizaci 2AG/1AG, stabilitu 2AG/1AG a matricové efekty při UPLC-MS/MS analýze 2AG a AEA v lidské plazmě. Toluen zabránil jak izomerizaci 2AG na 1AG, tak degradaci 2AG/1AG během odpařování. Toluenové extrakty obsahují pouze 2 % fosfolipidů způsobujících matricový efekt v plazmě ve srovnání s extrakty z tradičně používané směsi rozpouštědel chloroform-methanol. Toluen a všechna ostatní testovaná organická rozpouštědla poskytují srovnatelné výtěžky extrakce 2AG a AEA (60-80 %). Na základě těchto příznivých vlastností toluenu jsme vyvinuli a ověřili metodu UPLC-MS/MS s pozitivní ionizací elektrosprejem (ESI+), která umožňuje současné přesné a precizní měření 2AG a AEA v lidské plazmě. Metoda UPLC-MS/MS byla křížově validována s dříve popsanou plně validovanou metodou GC-MS/MS pro AEA v lidské plazmě. Mezi výsledky získanými metodami UPLC-MS/MS (y) a GC-MS/MS (x) byla pozorována těsná korelace (r(2)=0,821) (y=0,01+0,85x). Metoda UPLC-MS/MS je vhodná pro rutinní měření 2AG a AEA ve vzorcích lidské plazmy (1 ml) v klinických podmínkách, jak ukázaly kontrolní vzorky plazmy zpracovávané po dobu 100 dnů. Metoda UPLC-MS/MS byla dále rozšířena na lidskou moč. V moči nebyl AEA detekovatelný a 2AG byl detekován pouze ve 3 z 19 vzorků od zdravých osob při hodnotách 160, 180 a 212 pM, což odpovídá 12,3, 14,5 a 9,9 pmol/mmol kreatininu.