Team:Cambridge/Protocols/Acetone Precipitation of Proteins

Zpět na protokoly

• 1 Acetonové srážení proteinů
  • 1.1 Teorie
  • 1.2 Praxe
  • 1.3 Bezpečnost

Srážení proteinů acetonem

Po přečištění proteinů je nutné odstranit chemické látky zachycené z elučních pufrů a koncentrovat vzorek proteinů, aby bylo možné následné zpracování.

Teorie

Bílkoviny jsou v acetonu nerozpustné (zejména při nízkých teplotách), zatímco mnoho malých molekul, které by mohly narušit následnou práci s bílkovinami, je rozpustných. Srážením proteinů v tomto rozpouštědle můžete odstranit kontaminující pufr a koncentrovat protein do pelety, kterou lze znovu rozpustit jinými rozpouštědly.

Praxe

1. Přibližně 30 minut před zahájením práce zchlaďte vzorek acetonu o objemu 4krát větším, než je objem roztoku proteinu, který chcete srážet, v mrazničce -20.
2. Vzorek proteinu rozlijte do odstředivkových zkumavek pro stolní odstředivku.
3. Ke vzorku bílkovin přidejte studený aceton.
4. Zkumavky promíchejte vířením.
5. Inkubujte 60 minut při -20.
6. Odstřeďujte 10 minut při 13 000 xG
7. Dekantujte supernatant – snažte se nenarušit peletu.
8. Nechte víčka na zkumavkách, aby se odpařil zbývající aceton.
9. Znovu rozpusťte v jakémkoli pufru, který vyžadují následné procesy.

Bezpečnost

.