En dødsulykke i forbindelse med to nye hallucinogene forbindelser: 4-Methoxyphencyclidin og 4-Hydroxy-N-methyl-N-ethyltryptamin: 4-Methoxyphencyclidin og 4-Hydroxy-N-methyl-N-ethyltryptamin

Kemiske strukturer.

En anden gruppe af hallucinogene forbindelser, der er baseret på strukturelle ligheder med psilocin, omfatter tryptaminer såsom 4-acetoxy-N-methyl-N-ethyltryptamin (4-acetoxy-MET). Denne forbindelse, der også er kendt som metacetin eller 4-AcO-MET, er en homolog af O-Acetylpsilocin (4-AcO-DMT). Det er en ny forbindelse med meget lidt historisk brug for mennesker. Et beslægtet, men mindre kendt psykedelisk stof er 4-hydroxy-N-methyl-N-ethyltryptamin (4-HO-MET). Det er også en strukturel og funktionel analog af psilocin samt 4-hydroxyl-analog af methylethyltryptamin (MET). Tilsvarende er dette stof sjældent blevet fundet i menneskelig brug (figur 1).

I denne rapport beskrives for første gang post mortem-koncentrationer af 4-MeO-PCP i perifert blod, centralt blod, lever, glaslegeme, urin og maveindhold i et dødsfald, der hovedsageligt er relateret til dette stof. Der blev anvendt mindre ændringer af en tidligere rapporteret bekræftende analyseprocedure (5). Selv om 4-HO-MET også blev påvist og bekræftet (ved gaskromatografi-massespektrometri, GC-MS), blev det ikke kvantificeret.

Metoder

Sagsberetning

Denne 54-årige mand (188 cm, 128 kg) boede i et selvstændigt botilbud på grund af sine psykiatriske sygdomme, herunder skizoaffektiv depressiv lidelse. Han blev fundet ukontaktbar i sin seng under et velfærdstjek udført af facilitetsforstanderen om morgenen den 31. december 2014, som hans bekymrede mor havde iværksat, da han ikke besvarede hendes telefonopkald. Hans død blev bekræftet på stedet af akutlægepersonale uden genoplivning. Hans sygehistorie omfattede forhøjet blodtryk og stofmisbrug. Han var kendt for at bruge alkohol, marihuana, methamfetamin og PCP. Ifølge hans mor havde han været ædru fra stoffer og alkohol i mange år, men på et tidspunkt bestilte han et hvidt pulver fra internettet, som hun kaldte “3-MeO-PCP”. En lille pose med betegnelsen “#2”, der indeholdt en fin krystallinsk rest, blev fundet på hans værelse på kommoden. Der blev ikke fundet andre narkotikaudstyr. Under et besøg på skadestuen for unormal adfærd den 20. september 2014 indrømmede han over for personalet, at han tog “3-MeO-PCP” for at behandle sin depression. Han indrømmede også at have haft synkopale episoder, mens han tog stoffet.

En fuldstændig obduktion blev foretaget den 1. januar 2015 kl. 10.50 ca. 25 timer efter, at han var blevet fundet, og dokumenterede lungeoverbelastning og ødem (højre 840 g; venstre 880 g) og skum i hans mund og luftveje, der var i overensstemmelse med akut stofforgiftning. Hans hjerte var let forstørret (510 g) med let kammerudvidelse. Der var kongestiv hepatosplenomegali og minimal hepatisk steatose. Der var ingen traumatiske skader eller andre væsentlige fund.

Postmortemprøveindsamling

Alle analyserede prøver blev indsamlet ved obduktionen på San Diego County Medical Examiner’s Office. Perifert blod (∼20 mL) blev udtaget fra venstre fælles iliacal vene (blod, der vender tilbage fra benet og visuelt identificeres i bækkenet ved obduktionen) og opbevaret i standardglasrør indeholdende natriumfluorid (100 mg) og kaliumoxalat (20 mg). Det centrale blod blev opsamlet direkte fra hjertet og anbragt i identiske rør. Der blev udtaget sektioner af den højre leverlap og opbevaret i en uigennemsigtig 0,118 l plastbeholder uden konserveringsmiddel. Prøver af glaslegeme blev udtaget fra øjnene med en sprøjte og opbevaret i et glasrør uden konserveringsmiddel. Urinen blev opsamlet i en uigennemsigtig plastbeholder på 0,118 l uden konserveringsmiddel. Hele maveindholdet blev også opsamlet i en uigennemsigtig plastbeholder på 0,118 l uden konserveringsmiddel. Alle prøver blev opbevaret ved 4 °C, indtil de blev analyseret inden for 3 måneder efter indsamlingen.

Toksikologi

Der blev udført et omfattende toksikologisk screeningsskema. Postmortalt blod blev screenet for alkohol og flygtige forbindelser (GC-flammeioniseringsdetektor headspace), 12 misbrugsstoffer panel ved ELISA (kokainmetabolit, opiater, methamfetamin, benzodiazepiner, cannabinoider, fentanyl, phencyclidin, oxycodon, metadon, zolpidem, carisoprodol og buprenorphin; Immunalysis, Inc, Pomona, CA, USA), en alkalisk drugscreening ved GC-MS efter fastfaseekstraktion og en syre/neutral drugscreening med HPLC-fotodiode array-detektion efter udfældning af prøven med acetonitril. Der blev også foretaget en yderligere screening (GC-MS) af urinprøven. Efter rutinemæssig praksis blev signifikante positive resultater bekræftet og kvantificeret ved efterfølgende og specifikke teknikker.

Alkalisk bloddrogscreening (GC-MS)

Drugsscreeningsproceduren har været anvendt af dette laboratorium i over 7 år og er tidligere beskrevet (6). Den består kort fortalt af en rutinemæssig fastfaseekstraktionsteknik ved hjælp af SPEWare Trace J-ekstraktionspatroner. To milliliter af kalibratorer, kontroller og casework blev ekstraheret efter tilsætning af cyclizin (200 µL, 5 µg/mL: intern standard) og ascorbinsyre (200 µL, 2 % opløsning). Prøverne blev derefter udfældet med zinksulfat (5 mL, 5 % methanolisk opløsning) og behandlet med natriumacetatbuffer (4 mL, pH 6,0). SPE-patronerne blev forbehandlet med methanol (3 mL), afioniseret vand (3 mL) og natriumacetatbuffer (2 mL), inden prøverne blev tilsat. Efter ekstraktionen af prøverne blev SPE-patronerne vasket med deioniseret vand (3 mL), eddikesyre (0,1 M; 2 mL) og methanol (3 mL). Patronerne blev tørret i 3 minutter, og prøverne blev elueret med dichlormethan/isopropanol/14,8 M ammoniumhydroxidopløsning (78/20/2). Prøverne blev derefter inddampet (30°C, under en nitrogenstrøm) og rekonstitueret med ethylacetat (150 µL). En mikroliter (splitless) af hvert ekstrakt blev derefter injiceret i GC-MS-systemet for at opnå adskillelse og identifikation af alkaliske stoffer. Der blev anvendt en analysekolonne på 15 m, 0,25 mm i diameter og 0,25 µm filmtykkelse (Phenomenex Zebron, ZB-5MS) med helium som bæregas (1,1 mL/min). Indgangstemperaturen i gaskromatografen (Agilent Technologies, 7890A, Santa Clara, CA, USA) var 250 °C, og ovntemperaturen var oprindeligt 85 °C, med en rampe på 40 °C/min op til 170 °C (holdt 4 min.), derefter 40 °C/min til 190 °C (holdt 5 min.) og endelig 10 °C/min op til 300 °C (holdt 7 min.). MS Aux var 280°C. Den masseselektive detektor (Agilent Technologies, 5975C) blev indstillet i scantilstand med en opløsningsmiddelforsinkelse på 2,64 min. Peakidentifikation blev bestemt ved relativ retentionstid (i forhold til den interne standard: RRT) og derefter massespektral matchning fra et kommercielt MS-bibliotek og/eller SWGDRUG-massespektralbibliotek (http://www.swgdrug.org; mindst 70 % match).

4-MeO-PCP-konfirmationsanalyse

Materialer

Alle opløsningsmidler og kemikalier blev købt hos Fisher Scientific (Pittsburgh, PA, USA) og var af analytisk kvalitet eller bedre. Der blev anvendt borosilikatglasprøverør til alle faser af ekstraktionen (VWR International, Radnor, PA, USA). Den 4-MeO-PCP-stofstandard, der blev anvendt i kalibreringsformuleringerne, og den interne PCP-standard blev begge købt hos Cerilliant Corporation (Round Rock, TX, USA).

Ekstraktion

4-MeO-PCP blev bekræftet og kvantificeret ved hjælp af mindre ændringer af en tidligere beskrevet procedure for basiske stoffer ved hjælp af GC koblet med en nitrogenphosphor-detektor (NPD) (5). Analysen omfattede kalibratorer af fuldblod (svin) (0,10, 0,25, 0,50, 0,75, 1,0 og 2,0 mg/L), kalibratorer af leverhomogenat (svin) (0,25, 0,50, 0,75, 1,0, 2,0 og 3,0 mg/kg), caseprøver (fuldblod, lever, urin, glaslegeme og mave) samt positive og negative kontroller, der blev underkastet en alkalisk væske-/væskeekstraktionsprocedure. Til 1 mL kalibratorer, kontrolprøver og caseprøver tilsættes deioniseret vand (5 mL) og hvirvles i hvirvel. Derefter blev der tilsat en intern arbejdsstandard (100 µL PCP, 10 mg/L) og hvirvlet. Prøverne blev gjort alkaliske ved tilsætning af koncentreret ammoniumhydroxid (1 mL), hvorefter de igen blev vortexet. Der blev tilsat 1-Chlorobutan (6 mL), og rørene blev lukket og blandet på en mekanisk vippemaskine i 30 min. Prøverne blev derefter centrifugeret i 5 min. ved ∼2,400 g. Der blev tilsat ca. 200 mg natriumsulfat til hvert rør for at undertrykke emulsioner, og rørene blev centrifugeret i yderligere 5 min. ved 2,400 g. Det øverste organiske lag blev derefter overført til nye reagensglas. Der blev tilsat ca. 1,0 N saltsyre (3,5 mL), og rørene blev blandet i 30 minutter. Derefter blev rørene centrifugeret i 5 min. ved 2 400 g, inden det øverste organiske lag blev suget op til affald. Den resterende vandige del blev gjort alkalisk med koncentreret ammoniumhydroxid (1 mL) og vortexet. 1-Chlorobutan (3 mL) blev tilsat, og rørene blev igen blandet i 30 min. Prøverne blev derefter centrifugeret i 5 min. ved 2 400 g, inden det øverste organiske lag blev overført til nye reagensglas. Det organiske lag blev tørret under en nitrogenstrøm ved 30 °C. Prøverne blev rekonstitueret med methanol (100 µL), inden de blev overført til autosampler-flasker til analyse ved GC-NPD.

Kromatografiske betingelser

Der blev anvendt følgende GC-NPD-betingelser i analysen. Prøverne (1 µL) blev indsprøjtet splitless i en GC (7890A; Agilent Technologies) udstyret med en kapillærkolonne (DB-17, 15 m, 0,25 i.d., 0,25 µm; Phenomenex, Torrance, CA, USA). Injektortemperaturen var 250 °C, og detektoren var indstillet til 280 °C. Den indledende ovntemperatur var 50 °C og blev optrappet med 35 °C/min til 275 °C og holdt i 7 minutter. Den samlede køretid efter injektion var 13,5 min. Hydrogen blev anvendt som bæregas med en konstant hastighed på 2 mL/min. Retentionstiden for PCP og 4-MeO-PCP var henholdsvis 5,2 og 6,0 min.

Validering

Detektionsgrænsen var 0,05 mg/L, og kvantificeringsgrænsen, bestemt ud fra den laveste kalibreringskoncentration, var 0,10 mg/L for fuldblod og 0,25 mg/kg for lever. Kontrolprøver, der blev fremstillet uafhængigt ved 0,50 og 1,5 mg/L i fuldblod, målte henholdsvis 0,47 ± 0,03 mg/L (gennemsnit ± standardafvigelse; N = 4) og 1,28 ± 0,06 mg/L (gennemsnit ± standardafvigelse; N = 4). Matrixeffekter blev evalueret ved ekstraktion og analyser af sammenlignelige kontrolprøver (0,5 og 1,5 mg/L) fremstillet i vand og et leverhomogenat. Niveauer på 0,47 ± 0,02 mg/L (gennemsnit ± standardafvigelse; N = 3) og 1,34 ± 0,18 mg/L (gennemsnit ± standardafvigelse; N = 5) blev bestemt for vand, og 0,45 ± 0,06 mg/kg (gennemsnit ± standardafvigelse; N = 4) og 1,47 ± 0,11 mg/kg (gennemsnit ± standardafvigelse; N = 4) blev bestemt for leverhomogenater. Både ekstraherede blindprøver (ekstrakt uden tilsætningsstoffer) og negative kontrolprøver (ekstrakt, der kun indeholder intern standard) bekræftede, at der ikke var interferens og/eller kontaminering.

Resultater og diskussion

4-MeO-PCP blev oprindeligt påvist ved ELISA-screening for PCP. Screeningen, der blev etableret i dette laboratorium med 5,0 ng/mL PCP som reference, gav et positivt resultat med 41 % binding sammenlignet med en negativ prøve (100 % binding). I det forelagte tilfælde viste det centrale blod 2 % binding – et klart positivt resultat. PCP blev ikke påvist ved en rutinemæssig bekræftelsesmetode. PCP-metoden (GC-MS selektiv ionovervågning) havde en detektions- og kvantificeringsgrænse på henholdsvis 2,0 og 5,0 ng/mL. 4-MeO-PCP blev efterfølgende formodet identificeret i det perifere blod fra SWGDRUG-massespektralbiblioteket (http://www.swgdrug.org) efter ekstraktion i fast fase ved hjælp af en GC-MS alkalisk screeningsmetode (6) (figur 2). Det blev bekræftet med ekstraktion og en fuld massespektralscanning af en ren stamme af forbindelsen på 10,4 min (RRT = 1,25; sammenlignet med intern standard cyclizin) med signifikante ioner af 121, 189, 230, 272 og 147 (figur 3).