Den potentielle brug af inducerede pluripotente stamceller (iPSCs) i personlige regenerative medicinske anvendelser kan øges ved hjælp af transgene teknikker, herunder ekspression af konstitutive cellemærker, differentieringsrapportører eller modulatorer af sygdomsfænotyper. Der er således en forudsætning for reproducerbar transgenekspression blandt iPSC-subkloner med isogene eller forskellige genetiske baggrunde. Ved brug af virus- eller transposonvektorer er det vanskeligt at kontrollere transgene integrationssteder og antallet af kopier og næsten umuligt at reproducere på tværs af flere cellelinjer. Desuden er tilfældigt integrerede transgener ofte udsat for plejotropiske positionseffekter som følge af epigenetiske ændringer, der er indbygget i differentieringen, hvilket underminerer anvendelser i iPSC’er. For at løse dette problem har vi tilpasset populære TALEN- og CRISPR/Cas9-nukleaseteknologier for at indføre transgener i foruddefinerede loci og overvinde tilfældige positionseffekter. AAVS1 er et eksemplarisk locus inden for PPP1R12C-genet, som muliggør robust ekspression af CAG-promotor-drevne transgener. Genmålretning kontrollerer transgenets kopiantal, således at reporterekspressionsmønstre er reproducerbare og skalerbare ∼2-foldigt. Desuden opretholdes genekspressionen under langvarig humant iPSC-kultur og in vitro-differentiering langs flere lineager. Her skitserer vi vores AAVS1-målretningsprotokol ved hjælp af standardiserede donorvektorer og konstruktionsmetoder samt giver praktiske overvejelser vedrørende iPSC-kultur, lægemiddelvalg og genotypning.