Under helingsprocessen efter knoglebrud dannes der blød callus ved siden af brudstedet, erstattes af hård callus og omdannes til sidst til den oprindelige knoglekonfiguration. Selv om det er rapporteret, at periostets cambiumlag spiller en væsentlig rolle i callusdannelsen, mangler vi stadig direkte in vivo beviser for dette. For at undersøge cellelinjen i den bløde callus analyserede vi processen med brudheling i Prx1-Cre;ROSA26-reporter (R26R), Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R, Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R, Sox9-CreERT2;R26R og Sox9-LacZ-mus med X-gal-farvning. Hos Prx1-Cre;R26R-musene, hvor cellerne i periostet farvede for X-gal før bruddet, var alle celler i den bløde callus X-gal-positive, mens cellerne i periostet før bruddet hos Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R-musene farvede for X-gal, og den bløde callus delvis bestod af X-gal-positive celler. I modsætning hertil var der hos Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R-musene, hvor de modne osteoblaster i periostets cambiumlag blev markeret før bruddet, ingen celler i den bløde callus på brudstedet X-gal-positive. Disse resultater tyder på, at de fleste celler i den bløde callus stammer fra de mesenkymale progenitors i periost og ikke fra modne osteoblastiske celler. Det er interessant, at der hos Sox9-LacZ-musene opstod Sox9-eksprimerende X-gal-positive celler i periostet ved siden af brudstedet 3 dage efter bruddet. Vi påviste dette ved at injicere tamoxifen i Sox9-CreERT2;R26R-musene i 3 dage efter bruddet, således at disse Sox9-eksprimerende periostale celler gav anledning til celler i de bløde og hårde calli. Vores resultater viser, at de periostale celler, hvor Sox9-ekspressionen induceres lige efter bruddet, er hovedkilden til chondrocytter og osteoblaster i brudkallus.