Kære redaktør,
Det er for nylig blevet hævdet, at Ellmans metode ikke har tilstrækkelig nøjagtighed til måling af kolinesteraseaktiviteter (ChE’er) (Komersová et al., 2007; Sinko et al., 2007; Pohanka et al., 2011; Dingova et al., 2014). Denne metode blev først introduceret og beskrevet af Ellman og hans kolleger og er baseret på thiocholin-derivat (acetyl- eller butyryl) hydrolyse af ChE’er (ægte eller pseudo) og reaktion af det resulterende thiocholin med thiolreagenset 5,5′-dithiobis-2-nitrobenzoesyre (DTNB) og dannelse af 5-thio-2-nitrobenzoesyre (TNB)-anion. Ved måling af TNB-ionabsorptionen ved 410 nm for pseudo-ChE og 440 nm for reticulocytært acetyl-ChE bestemmes indirekte ChE-aktiviteten (Ellman et al., 1961). Nogle forfattere foreslog, at indoxylacetat er et bedre substrat end acetylthiocholin (ATCH), da det ikke reagerer med oxim-antidoter og thiol, der anvendes til Ellmans metode (Pohanka et al., 2011). Desuden interagerer DTNB, som er ustabilt, med frie sulfhydrylgrupper i prøven og kan påvirke kolinesteraseaktiviteten (Dingova et al., 2014). Andre forskere viste, at oximer reagerer med ATCH (oximolyse), hvorved der dannes thiocholin og dermed TNB-ion (Sinko et al., 2007). Nogle forfattere nævnte også, at når koncentrationen af DTNB er langt højere end koncentrationen af ATCH, nedsættes hydrolysesatsen for ATCH, hvilket resulterer i en lavere målt ChE-aktivitet (Komersová et al., 2007).
Og selv om ovennævnte problemer er blevet anført om Ellmans metode, har hvert af dem sin egen logiske løsning. For det første fortyndes ved en simpel passende fortynding af prøven også de thiol- og oximholdige forbindelser i prøven, og dermed reduceres omfanget af DTNB’s reaktion med disse stoffer betydeligt (Mohammadi et al., 2017). For det andet er de molære dæmpningskoefficienter for indoxylacetat og TNB henholdsvis 3900 M-1.cm-1 (Pohanka et al., 2011) og 13600 M-1.cm-1 (Ellman et al., 1961). Således er detektionsgrænsen for måling af ChE-aktivitet ved hjælp af DTNB ca. 3,5 gange lavere end ved hjælp af indoxylacetat. For det tredje er det bedste forhold mellem DTNB/ATCH-koncentrationer for DTNB-koncentrationer på 0,2-0,598 mM 1,25-3,74, hvilket resulterer i en optimal hastighed for ATCH-hydrolyse af ChE (Komersová et al., 2007).