Team:Cambridge/Protokoller/Acetonudfældning af proteiner

Back to Protocols

• 1 Acetonudfældning af proteiner
  • 1.1 Teori
  • 1.2 Praksis
  • 1.3 Sikkerhed

Acetoneudfældning af proteiner

Efter oprensning af proteiner er det nødvendigt at fjerne kemikalier, der er tilbageholdt i elueringsbufferne, og at koncentrere proteinprøven for at muliggøre downstream-behandling.

Teori

Proteiner er uopløselige i acetone (især ved lave temperaturer), mens mange små molekyler, som kan forstyrre nedstrømsarbejdet med proteiner, er opløselige. Ved at fælde proteiner i dette opløsningsmiddel kan man fjerne bufferforurening og koncentrere protein til en pellet, som kan genopløses af andre opløsningsmidler.

Praksis

1. Ca. 30 min. før du begynder, afkøles en prøve af acetone 4 gange volumenet af den proteinopløsning, du ønsker at fælde, i en fryser på -20.
2. Spild proteinprøven i centrifugerør til bordcentrifugen.
3. Tilsæt kold acetone til proteinprøven.
4. Vortex rørene for at blande.
5. Inkubér i 60 minutter ved -20.
6. Centrifuger i 10 minutter ved 13 000 xG
7. Dekanter supernatanten – prøv ikke at forstyrre pellet.
8. Lad lågene være på rørene for at lade den resterende acetone fordampe.
9. Genopløs i den buffer, som downstream-processerne kræver.

Sikkerhed