Der 21-Hydroxylase-Autoantikörper (21-OH Ab) ELISA-Kit ist nur für den Gebrauch durch Fachleute bestimmt und dient der quantitativen Bestimmung von 21-OH Ab in Humanserum. Die autoimmune Zerstörung der Nebennierenrinde ist die häufigste Ursache der Addison-Krankheit, und Autoantikörper gegen das nebennierenspezifische Enzym Steroid 21-Hydroxylase sind wichtige Marker für die Autoimmunität der Nebennieren. Dies kann der Fall sein, wenn sich die Krankheit als Morbus Addison oder als Teil der autoimmunen polyglandulären Syndrome (APS) Typ I oder Typ II präsentiert.
Im 21-OH Ab ELISA-Kit werden 21-OH Ab in Patientenseren, Kalibratoren und Kontrollen mit 21-OH, das auf ELISA-Plattenvertiefungen aufgetragen ist, in Wechselwirkung gebracht. Nach einer 16- bis 20-stündigen Inkubation werden die Proben verworfen, so dass 21-OH Ab an das auf den Vertiefungen beschichtete 21-OH gebunden bleibt. In einem zweiten Inkubationsschritt wird 21-OH-Biotin hinzugefügt, wobei durch die Fähigkeit von 21-OH Ab, zweiwertig zu wirken, eine Brücke zwischen dem auf der Platte immobilisierten 21-OH und 21-OH-Biotin gebildet wird. Die Menge des gebundenen 21-OH-Biotin wird dann in einem dritten Inkubationsschritt durch Zugabe von Streptavidin-Peroxidase (SA-POD) bestimmt, die spezifisch an Biotin bindet. Überschüssiges, nicht gebundenes SA-POD wird dann abgewaschen, und die Zugabe des Peroxidase-Substrats 3,3′,5,5′-Tetramethlybenzidin (TMB) führt zur Bildung einer blauen Farbe. Diese Reaktion wird durch Zugabe einer Stopplösung gestoppt, wodurch sich der Inhalt der Vertiefungen gelb färbt. Die Absorption der gelben Reaktionsmischung bei 450 nm und 405 nm wird dann mit einem ELISA-Plattenlesegerät gemessen. Eine höhere Absorption zeigt das Vorhandensein von 21-OH Ab in der Testprobe an. Das Ablesen bei 405 nm ermöglicht die Quantifizierung hoher Absorptionswerte. Es wird empfohlen, dass Werte unter 1 U/ml bei 450 nm gemessen werden sollten. Wenn es möglich ist, nur bei einer Wellenlänge zu messen, kann 405nm verwendet werden. Das Messintervall beträgt 0,3 – 100 U/ml (willkürliche Einheiten).