Während des Heilungsprozesses nach einem Knochenbruch bildet sich weicher Kallus in der Nähe der Bruchstelle, wird durch harten Kallus ersetzt und schließlich in die ursprüngliche Knochenkonfiguration zurückgebildet. Obwohl der Kambiumschicht des Periosts eine wesentliche Rolle bei der Kallusbildung zugeschrieben wird, fehlen uns noch immer direkte In-vivo-Nachweise dafür. Um die Zellabstammung des weichen Kallus zu untersuchen, analysierten wir den Prozess der Frakturheilung in Prx1-Cre;ROSA26-Reporter (R26R), Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R, Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R, Sox9-CreERT2;R26R und Sox9-LacZ-Mäusen mit X-gal-Färbung. Bei den Prx1-Cre;R26R-Mäusen, bei denen die Zellen des Periosts vor der Fraktur mit X-gal angefärbt wurden, waren alle Zellen im weichen Kallus X-gal-positiv, während bei den Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R-Mäusen die Zellen des Periosts vor der Fraktur mit X-gal angefärbt wurden und der weiche Kallus teilweise aus X-gal-positiven Zellen bestand. Im Gegensatz dazu waren bei den Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R-Mäusen, bei denen die reifen Osteoblasten in der Kambiumschicht des Periosts vor der Fraktur markiert wurden, keine Zellen im weichen Kallus an der Frakturstelle X-gal-positiv. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die meisten Zellen im weichen Kallus von den mesenchymalen Vorläufern im Periost stammen und nicht von reifen osteoblastischen Zellen. Interessanterweise traten bei den Sox9-LacZ-Mäusen 3 Tage nach der Fraktur Sox9-exprimierende, X-gal-positive Zellen im Periost neben der Frakturstelle auf. Wir haben dies nachgewiesen, indem wir den Sox9-CreERT2;R26R-Mäusen 3 Tage nach der Fraktur Tamoxifen injiziert haben, so dass aus diesen Sox9-exprimierenden Periostzellen Zellen in den weichen und harten Kalli entstanden sind. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Periostzellen, in denen die Sox9-Expression unmittelbar nach der Fraktur induziert wird, die Hauptquelle der Chondrozyten und Osteoblasten im Frakturkallus sind.