Liebe Redaktion,
vor kurzem wurde argumentiert, dass die Ellman-Methode keine ausreichende Genauigkeit für die Messung von Cholinesterase-Aktivitäten (ChEs) aufweist (Komersová et al., 2007; Sinko et al., 2007; Pohanka et al., 2011; Dingova et al., 2014). Diese Methode wurde erstmals von Ellman und seinen Kollegen eingeführt und beschrieben und basiert auf der Hydrolyse von Thiocholin-Derivaten (Acetyl- oder Butyryl) durch ChEs (echte oder Pseudo-ChEs) und der Reaktion des resultierenden Thiocholins mit dem Thiol-Reagenz 5,5′-Dithiobis-2-nitrobenzoesäure (DTNB) und der Bildung des 5-Thio-2-nitrobenzoesäure (TNB)-Anions. Die Messung der TNB-Ionenabsorption bei 410 nm für Pseudo-ChE und 440 nm für retikulozytäres Acetyl-ChE bestimmt indirekt die ChE-Aktivität (Ellman et al., 1961). Einige Autoren schlugen vor, dass Indoxylacetat ein besseres Substrat als Acetylthiocholin (ATCH) ist, da es nicht mit den Oxim-Antidots und dem für die Ellman-Methode verwendeten Thiol reagiert (Pohanka et al., 2011). Außerdem interagiert das instabile DTNB mit freien Sulfhydrylgruppen in der Probe und kann die Cholinesterase-Aktivität beeinträchtigen (Dingova et al., 2014). Andere Forscher zeigten, dass Oxime mit ATCH reagieren (Oximolyse) und dabei Thiocholin und folglich TNB-Ionen entstehen (Sinko et al., 2007). Einige Autoren erwähnten auch, dass, wenn die Konzentration von DTNB viel höher ist als die Konzentration von ATCH, die Hydrolysegeschwindigkeit von ATCH verringert wird, was zu einer niedrigeren gemessenen ChE-Aktivität führt (Komersová et al., 2007).
Obwohl die oben genannten Probleme mit der Ellman-Methode genannt wurden, hat jedes von ihnen seine eigene logische Lösung. Erstens werden durch eine einfache angemessene Verdünnung der Probe auch die thiol- und oximhaltigen Verbindungen in der Probe verdünnt, wodurch das Ausmaß der Reaktion von DTNB mit diesen Substanzen erheblich reduziert wird (Mohammadi et al., 2017). Zweitens betragen die molaren Schwächungskoeffizienten von Indoxylacetat und TNB 3900 M-1.cm-1 (Pohanka et al., 2011) bzw. 13600 M-1.cm-1 (Ellman et al., 1961). Somit ist die Nachweisgrenze für die Messung der ChE-Aktivität durch DTNB etwa 3,5 Mal niedriger als die durch Indoxylacetat. Drittens liegt bei DTNB-Konzentrationen von 0,2-0,598 mM das beste Verhältnis von DTNB/ATCH-Konzentrationen bei 1,25-3,74, was zu einer optimalen Rate der ATCH-Hydrolyse durch ChE führt (Komersová et al., 2007).