Team:Cambridge/Protokolle/Acetonausfällung von Proteinen

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• 1 Acetonausfällung von Proteinen
  • 1.1 Theorie
  • 1.2 Praxis
  • 1.3 Sicherheit

Acetonfällung von Proteinen

Nach der Proteinreinigung ist es notwendig, die in den Elutionspuffern zurückgehaltenen Chemikalien zu entfernen und die Proteinprobe zu konzentrieren, um eine Weiterverarbeitung zu ermöglichen.

Theorie

Proteine sind in Aceton unlöslich (insbesondere bei niedrigen Temperaturen), während viele kleine Moleküle, die die nachgeschaltete Proteinverarbeitung stören könnten, löslich sind. Durch Ausfällen von Proteinen in diesem Lösungsmittel können Sie Pufferverunreinigungen entfernen und Proteine in einem Pellet konzentrieren, das durch andere Lösungsmittel wieder aufgelöst werden kann.

Praxis

1. Kühlen Sie ca. 30 Minuten vor Beginn eine Probe Aceton mit dem 4-fachen Volumen der Proteinlösung, die Sie ausfällen möchten, in einem -20 Gefrierschrank.
2. Geben Sie die Proteinprobe in Zentrifugenröhrchen für die Tischzentrifuge.
3. Geben Sie kaltes Aceton zu der Proteinprobe.
4. Schütteln Sie die Röhrchen, um sie zu mischen.
5. Inkubieren Sie 60 Minuten lang bei -20.
6. Zentrifugieren Sie 10 Minuten lang bei 13 000 xG
7. Dekantieren Sie den Überstand – versuchen Sie, das Pellet nicht zu stören.
8. Die Deckel der Röhrchen abnehmen, um das restliche Aceton verdampfen zu lassen.
9. In dem für die nachgeschalteten Prozesse erforderlichen Puffer auflösen.

Sicherheit