Skip to content
Menu
CDhistory
CDhistory

Engineering the AAVS1 locus for consistent and scalable transgene expression in human iPSCs and their differentiated derivatives

Posted on 25 marraskuun, 2021 by admin

Indusoitujen pluripotenttien kantasolujen (indusoitujen pluripotenttien kantasolujen, englanniksi induced pluripotent stem cells, jäljempänä ’iPSCs’) potentiaalista käyttöä yksilöllisissä regeneratiivisen lääketieteen sovelluksissa voidaan lisätä transgeenien avulla, mukaan lukien konstitutiivisten solumerkkien, erilaistumisreporttien tai sairausfenotyyppien modulaattoreiden ilmentäminen. Näin ollen on olemassa ennakkotapaus toistettavissa olevan siirtogeenin ilmentymisestä iPSC-alakloonien välillä, joilla on isogeeninen tai erilainen geneettinen tausta. Virus- tai transposonivektoreita käytettäessä siirtogeenin integroitumiskohtia ja kopiomääriä on vaikea valvoa, ja niitä on lähes mahdotonta toistaa useissa solulinjoissa. Lisäksi satunnaisesti integroituneet siirtogeenit altistuvat usein pleiotrooppisille sijaintivaikutuksille, jotka ovat seurausta erilaistumiseen liittyvistä epigeneettisistä muutoksista, mikä heikentää iPSC-sovelluksia. Tämän ongelman ratkaisemiseksi olemme mukauttaneet suosittuja TALEN- ja CRISPR/Cas9-nukleaasitekniikoita siirtogeenien tuomiseksi ennalta määritettyihin lokuksiin ja satunnaisten sijaintivaikutusten voittamiseksi. AAVS1 on esimerkillinen lokus PPP1R12C-geenissä, joka mahdollistaa CAG-promoottorilla ohjattujen siirtogeenien vankan ilmentymisen. Geenin kohdentamisella kontrolloidaan siirtogeenin kopiomäärää siten, että reportterin ilmentymismallit ovat toistettavissa ja skaalattavissa ∼2-kertaisiksi. Lisäksi geeniekspressio säilyy pitkäaikaisen ihmisen iPSC-viljelyn ja in vitro -differentioitumisen aikana useissa eri linjoissa. Tässä hahmotellaan AAVS1-kohdistamisprotokollaa, jossa käytetään standardoituja luovuttajavektoreita ja rakentamismenetelmiä, sekä esitetään iPSC-viljelyä, lääkevalintaa ja genotyypin määritystä koskevia käytännön näkökohtia.

Vastaa Peruuta vastaus

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista. Pakolliset kentät on merkitty *

Viimeisimmät artikkelit

  • Acela on palannut: NYC tai Boston 99 dollarilla
  • Temple Fork Outfitters
  • Burr (romaani)
  • Trek Madone SLR 9 Disc
  • Jokainen valmistunut 2016 NBA:n vapaa agenttisopimus yhdessä paikassa

Arkistot

  • helmikuu 2022
  • tammikuu 2022
  • joulukuu 2021
  • marraskuu 2021
  • lokakuu 2021
  • syyskuu 2021
  • elokuu 2021
  • heinäkuu 2021
  • kesäkuu 2021
  • toukokuu 2021
  • huhtikuu 2021
  • DeutschDeutsch
  • NederlandsNederlands
  • SvenskaSvenska
  • DanskDansk
  • EspañolEspañol
  • FrançaisFrançais
  • PortuguêsPortuguês
  • ItalianoItaliano
  • RomânăRomână
  • PolskiPolski
  • ČeštinaČeština
  • MagyarMagyar
  • SuomiSuomi
  • 日本語日本語
©2022 CDhistory | Powered by WordPress & Superb Themes