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Características de una preparación de polvo de acetona de la γ-glutamil carboxilasa dependiente de la vitamina K

Posted on octubre 30, 2021 by admin

Un polvo de acetona, preparado a partir de los microsomas de hígado de ratas deficientes en vitamina K, conserva una γ-glutamil carboxilasa activa dependiente de la vitamina K. Aunque los requisitos básicos de la enzima son similares a los de la carboxilasa de los microsomas resuspendidos o de los microsomas solubilizados con detergente, la preparación de polvo de acetona revela algunas propiedades adicionales de la carboxilasa. La carboxilación del sustrato pentapéptido sintético fenilalanil-leucil-glutamil-valina puede ocurrir en ausencia de detergente no iónico; sin embargo, cuando la hidroquinona de la vitamina K impulsa la carboxilación en polvo de acetona se requiere un detergente no iónico para una actividad máxima. Se describen experimentos en los que el polvo de acetona se incuba con el pentapéptido, se pelletea por centrifugación, se resuspende con reactivos frescos y se vuelve a incubar. Sugieren que la baja V de la carboxilasa, observada por todos los investigadores, no es, al menos en parte, el resultado de la inactivación irreversible de la enzima ni del agotamiento de los reactivos, sino más bien de la acumulación de un inhibidor o inhibidores aún no identificados. El polvo de acetona preparado a partir de microsomas derivados de hígados de vacas nutricionalmente normales contiene γ-glutamil carboxilasa dependiente de la vitamina K. Esta enzima puede solubilizarse a partir del polvo utilizando Tritón X-100 y podría proporcionar un gran suministro de material de partida para la purificación de la enzima.

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