Equipo:Cambridge/Protocolos/Precipitación con acetona de proteínas

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• 1 Precipitación con acetona de proteínas
  • 1.1 Teoría
  • 1.2 Práctica
  • 1.3 Seguridad

Precipitación con acetona de las proteínas

Después de la purificación de las proteínas es necesario eliminar los productos químicos retenidos en los tampones de elución y concentrar la muestra de proteínas para permitir el procesamiento posterior.

Teoría

Las proteínas son insolubles en acetona (particularmente a bajas temperaturas) mientras que muchas pequeñas moléculas que podrían interferir con el trabajo posterior de las proteínas son solubles. Precipitando las proteínas en este disolvente se puede eliminar el contaminante del buffer y concentrar la proteína en un pellet que puede ser redisuelto por otros disolventes.

Práctica

1. Aproximadamente 30 minutos antes de empezar, enfriar una muestra de acetona 4 veces el volumen de la solución de proteína que se desea precipitar en un congelador de -20.
2. Derramar la muestra de proteína en tubos de centrífuga para la centrífuga de sobremesa.
3. Añadir acetona fría a la muestra de proteínas.
4. Agitar los tubos para mezclar.
5. Incubar durante 60 minutos a -20.
6. Centrifugar durante 10 minutos a 13 000 xG
7. Decantar el sobrenadante – tratar de no perturbar el pellet.
8. Dejar las tapas de los tubos para que se evapore la acetona restante.
9. Volver a disolver en cualquier tampón que requieran los procesos posteriores.

Seguridad