Durante el proceso de cicatrización tras la fractura ósea, se forma un callo blando adyacente al lugar de la fractura, que es sustituido por un callo duro, y finalmente se remodela a la configuración ósea original. Aunque se ha informado de que la capa de cambium del periostio desempeña un papel esencial en la formación del callo, todavía carecemos de pruebas directas in vivo de ello. Para investigar el linaje celular del callo blando, analizamos el proceso de curación de la fractura en ratones Prx1-Cre;ROSA26 reporter (R26R), Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R, Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R, Sox9-CreERT2;R26R y Sox9-LacZ con tinción X-gal. En los ratones Prx1-Cre;R26R, en los que las células del periostio se tiñeron de X-gal antes de la fractura, todas las células del callo blando fueron positivas a X-gal, mientras que en los ratones Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R, las células del periostio antes de la fractura se tiñeron de X-gal y el callo blando estaba compuesto en parte por células positivas a X-gal. En cambio, en los ratones Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R, en los que se marcaron los osteoblastos maduros de la capa de cambium del periostio antes de la fractura, ninguna célula del callo blando en el lugar de la fractura fue positiva para X-gal. Estos resultados sugieren que la mayoría de las células del callo blando derivan de los progenitores mesenquimales del periostio, y no de las células osteoblásticas maduras. Curiosamente, en los ratones Sox9-LacZ, las células positivas a X-gal que expresan Sox9 surgieron en el periostio adyacente al lugar de la fractura 3 días después de ésta. Lo demostramos inyectando tamoxifeno en los ratones Sox9-CreERT2;R26R durante 3 días después de la fractura, de modo que estas células del periostio que expresan Sox9 dieron lugar a células en el callo blando y duro. Nuestros hallazgos muestran que las células del periostio en las que se induce la expresión de Sox9 justo después de la fractura son la principal fuente de los condrocitos y osteoblastos del callo de fractura.