Estimado editor,
Recientemente se ha argumentado que el método de Ellman no tiene suficiente precisión para la medición de las actividades de las colinesterasas (ChEs) (Komersová et al., 2007; Sinko et al., 2007; Pohanka et al., 2011; Dingova et al., 2014). Este método fue introducido y descrito por primera vez por Ellman y sus colegas y se basa en la hidrólisis del derivado de la tiocolina (acetilo o butilo) por parte de las ChEs (verdadera o pseudo) y la reacción de la tiocolina resultante con el reactivo tiol 5,5′-ditiobis-2-nitrobenzoico (DTNB) y la formación del anión ácido 5-tio-2-nitrobenzoico (TNB). La medición de la absorción del ion TNB a 410 nm para la pseudo-ChE y a 440 nm para la acetil-ChE reticulocítica determina indirectamente la actividad de la ChE (Ellman et al., 1961). Algunos autores propusieron que el indoxilacetato es mejor sustrato que la acetiltiocolina (ATCH), ya que no reacciona con los antídotos de oxima y el tiol utilizados para el método de Ellman (Pohanka et al., 2011). Además, el DTNB, que es inestable, interactúa con los grupos sulfhidrilos libres de la muestra y puede afectar a la actividad de la colinesterasa (Dingova et al., 2014). Otros investigadores demostraron que las oximas reaccionan con la ATCH (oximólisis), produciendo tiocolina y, en consecuencia, el ion TNB (Sinko et al., 2007). Algunos autores también mencionaron que cuando la concentración de DTNB es muy superior a la concentración de ATCH, la tasa de hidrólisis de ATCH disminuye, lo que da lugar a una menor actividad de ChE medida (Komersová et al., 2007).
Aunque se han expuesto los problemas mencionados sobre el método de Ellman, cada uno de ellos tiene su propia solución lógica. En primer lugar, mediante una simple dilución adecuada de la muestra, los compuestos que contienen tiol y oxima en la muestra también se diluyen y, por lo tanto, el grado de reacción de la DTNB con estas sustancias se reduce considerablemente (Mohammadi et al., 2017). En segundo lugar, los coeficientes de atenuación molar del indoxilacetato y el TNB son de 3900 M-1.cm-1 (Pohanka et al., 2011) y 13600 M-1.cm-1 (Ellman et al., 1961) respectivamente. Por lo tanto, el límite de detección para la medición de la actividad de la ChE por DTNB es aproximadamente 3,5 veces menor que por indoxilacetato. En tercer lugar, para concentraciones de DTNB de 0,2-0,598 mM, la mejor relación de concentraciones de DTNB/ATCH es de 1,25-3,74, lo que da lugar a una tasa óptima de hidrólisis de ATCH por parte de la ChE (Komersová et al., 2007).