Équipe:Cambridge/Protocoles/Précipitation des protéines par l’acétone

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• 1 Précipitation des protéines par l’acétone
  • 1.1 Théorie
  • 1.2 Pratique
  • 1.3 Sécurité

Précipitation des protéines à l’acétone

Après purification des protéines, il est nécessaire d’éliminer les produits chimiques retenus dans les tampons d’élution et de concentrer l’échantillon de protéines pour permettre un traitement en aval.

Théorie

Les protéines sont insolubles dans l’acétone (en particulier à basse température) tandis que de nombreuses petites molécules qui pourraient interférer avec le travail en aval sur les protéines sont solubles. En précipitant les protéines dans ce solvant, vous pouvez éliminer le contaminant tampon et concentrer les protéines en un culot qui peut être redissous par d’autres solvants.

Pratique

1. Environ 30 min avant de commencer, refroidissez un échantillon d’acétone 4 fois le volume de la solution de protéines que vous souhaitez précipiter dans un congélateur -20.
2. Versez l’échantillon de protéines dans des tubes à centrifuger pour la centrifugeuse de paillasse.
3. Ajouter de l’acétone froide à l’échantillon de protéines.
4. Vortexer les tubes pour mélanger.
5. Incuber pendant 60 minutes à -20.
6. Centrifuger pendant 10 minutes à 13 000 xG
7. Décanter le surnageant – essayer de ne pas déranger le culot.
8. Laisser les couvercles des tubes pour laisser l’acétone restante s’évaporer.
9. Redissoudre dans n’importe quel tampon requis par les processus en aval.

Sécurité