Le kit ELISA d’auto-anticorps 21-hydroxylase (21-OH Ab) est destiné à être utilisé par des professionnels uniquement, pour la détermination quantitative de 21-OH Ab dans le sérum humain. La destruction auto-immune du cortex surrénalien est la cause la plus fréquente de la maladie d’Addison et les auto-anticorps dirigés contre l’enzyme stéroïde 21-hydroxylase spécifique des surrénales sont des marqueurs importants de l’auto-immunité surrénalienne. Cela peut être le cas si la maladie se présente comme la maladie d’Addison ou comme faisant partie des syndromes polyglandulaires auto-immuns (SPA) de type I ou de type II.
Dans le kit ELISA 21-OH Ab, les 21-OH Ab présents dans les sérums des patients, les calibrateurs et les contrôles peuvent interagir avec les 21-OH enduits sur les puits de la plaque ELISA. Après une incubation de 16 à 20 heures, les échantillons sont éliminés, laissant l’Ab 21-OH lié au 21-OH enduit sur les puits. La 21-OH-Biotine est ajoutée dans une seconde étape d’incubation où, grâce à la capacité de l’Ab 21-OH à agir de manière divalente, un pont est formé entre le 21-OH immobilisé sur la plaque et la 21-OH-Biotine. La quantité de 21-OH-Biotine liée est ensuite déterminée dans une 3ème étape d’incubation impliquant l’ajout de streptavidine peroxydase (SA-POD), qui se lie spécifiquement à la Biotine. L’excès de SA-POD non lié est ensuite éliminé par lavage et l’addition du substrat de la peroxydase, la 3,3′,5,5′-tétraméthylbenzidine (TMB), entraîne la formation d’une couleur bleue. Cette réaction est stoppée par l’ajout d’une solution d’arrêt, ce qui entraîne une coloration jaune du contenu du puits. L’absorbance du mélange réactionnel jaune à 450nm et 405nm est ensuite lue à l’aide d’un lecteur de plaque ELISA. Une absorbance plus élevée indique la présence de 21-OH Ab dans l’échantillon testé. La lecture à 405nm permet la quantification des absorbances élevées. Il est recommandé que les valeurs inférieures à 1 U/ml soient mesurées à 450nm. S’il est possible de lire à une seule longueur d’onde, on peut utiliser 405nm. L’intervalle de mesure est de 0,3 à 100 U/ml (unités arbitraires).