L’utilisation potentielle de cellules souches pluripotentes induites (iPSCs) dans des applications de médecine régénérative personnalisée peut être augmentée par des transgéniques, y compris l’expression d’étiquettes cellulaires constitutives, de rapporteurs de différenciation ou de modulateurs de phénotypes pathologiques. Il existe donc un précédent pour l’expression reproductible de transgènes parmi les sous-clones d’iPSC ayant des antécédents génétiques divers ou isogéniques. En utilisant des vecteurs de type virus ou transposon, les sites d’intégration et le nombre de copies de transgènes sont difficiles à contrôler et presque impossibles à reproduire sur plusieurs lignées cellulaires. De plus, les transgènes intégrés de façon aléatoire sont souvent sujets à des effets de position pléiotropiques en raison des changements épigénétiques inhérents à la différenciation, ce qui compromet les applications dans les iPSC. Pour y remédier, nous avons adapté les technologies populaires de nucléase TALEN et CRISPR/Cas9 afin d’introduire des transgènes dans des loci prédéfinis et de surmonter les effets de position aléatoires. AAVS1 est un locus exemplaire dans le gène PPP1R12C qui permet l’expression robuste de transgènes dirigés par le promoteur CAG. Le ciblage du gène contrôle le nombre de copies du transgène de sorte que les modèles d’expression des rapporteurs sont reproductibles et extensibles d’un facteur ∼2. En outre, l’expression des gènes est maintenue pendant la culture à long terme des iPSC humaines et la différenciation in vitro selon de multiples lignées. Ici, nous décrivons notre protocole de ciblage AAVS1 en utilisant des vecteurs donneurs et des méthodes de construction standardisés, et nous fournissons des considérations pratiques pour la culture des iPSC, la sélection des médicaments et le génotypage.