Pouvoir diagnostique des tests de laboratoire pour la sphérocytose héréditaire : une étude comparative chez 150 patients regroupés selon leurs caractéristiques moléculaires et cliniques

Abstract

Contexte Le diagnostic de laboratoire de la sphérocytose héréditaire repose généralement sur des tests de fragilité osmotique des globules rouges à base de NaCl ou de glycérol ; plus récemment, un test ciblant directement le défaut moléculaire de la sphérocytose héréditaire (test de liaison à l’éosine-5′-maléimide) a été proposé. Aucun des tests disponibles ne permet d’identifier tous les cas de sphérocytose héréditaire.Conception et Méthodes Nous avons comparé les performances du test de liaison à l’éosine-5′-maléimide, des études de fragilité osmotique au NaCl sur sang frais et incubé, du test de lyse au glycérol, du test de lyse au glycérol acidifié et du test de Pink sur une série de 150 patients atteints de sphérocytose héréditaire regroupés selon le phénotype clinique et la protéine défectueuse, dans le but final de trouver la combinaison de tests associée au pouvoir diagnostique le plus élevé, même dans les cas les plus légers de sphérocytose héréditaire.Résultats Le test de liaison à l’éosine-5′-maléimide avait une sensibilité de 93 % et une spécificité de 98 % pour détecter la sphérocytose héréditaire : la sensibilité était indépendante du type et de la quantité de défaut moléculaire et du phénotype clinique. Le test de lyse au glycérol acidifié et le test de Pink ont montré une sensibilité comparable (95 % et 91 %). La sensibilité des tests de fragilité osmotique au NaCl, communément considérés comme l’étalon-or pour le diagnostic de la sphérocytose héréditaire, était de 68 % sur sang frais et de 81 % sur sang incubé, et diminuait encore dans les cas compensés (53 % et 64 %, respectivement). La combinaison du test de liaison à l’éosine-5′-maléimide et du test de lyse au glycérol acidifié a permis d’identifier tous les patients atteints de sphérocytose héréditaire. Le test de liaison à l’éosine-5′-maléimide a montré la plus grande spécificité de la maladie.Conclusions Chaque type de test ne permet pas de diagnostiquer certains cas de sphérocytose héréditaire. L’association d’un test de liaison à l’éosine-5′-maléimide et d’un test de lyse au glycérol acidifié a permis d’identifier tous les patients atteints de sphérocytose héréditaire dans cette série et représente donc une stratégie diagnostique actuellement efficace pour la sphérocytose héréditaire, y compris les cas légers/compensés.

Introduction

La sphérocytose héréditaire est l’anémie hémolytique congénitale la plus fréquente chez les Caucasiens, touchant environ 1 individu sur 1000-20001,2. Le défaut moléculaire est très hétérogène et implique les gènes codant pour la spectrine, l’ankyrine, la bande 3 et la protéine 4.2,3 et le degré d’hémolyse est très variable, allant d’une anémie entièrement compensée à une anémie dépendante des transfusions.

La marque de laboratoire typique de la sphérocytose héréditaire, bien qu’elle ne soit pas spécifique, est la présence de sphérocytes sur un frottis de sang périphérique, qui sont détectables chez 97 % des patients4. Cependant, il peut y avoir très peu de sphérocytes chez certains patients4,5 et des opérateurs qualifiés sont donc nécessaires pour les détecter ; de plus, l’examen microscopique des globules rouges est de plus en plus omis à l’ère de l’automatisation des laboratoires. Le diagnostic en laboratoire de la sphérocytose héréditaire repose donc généralement sur des tests qui exploitent le rapport surface/volume, typiquement réduit dans les érythrocytes sphériques, en particulier les tests de fragilité osmotique des globules rouges à différentes concentrations de chlorure de sodium (NaCl) sur du sang frais et incubé,6 et les tests qui mesurent l’étendue ou la vitesse de lyse des globules rouges en suspension dans des solutions de glycérol tamponnées, c’est-à-dire la lyse au glycérol.le test de lyse au glycérol (GLT)7, le test de lyse au glycérol acidifié (AGLT)8 et le test de Pink9. Cependant, ces tests ne détectent pas une proportion variable de cas de sphérocytose héréditaire, en particulier les plus légers,6,10-12 et ne permettent pas de différencier la sphérocytose héréditaire de la sphérocytose secondaire associée à d’autres pathologies, principalement les anémies hémolytiques auto-immunes13.-15

Plus récemment, le test de cryohémolyse,16,17 basé sur l’observation que les globules rouges de patients atteints de sphérocytose héréditaire sont particulièrement sensibles au refroidissement à 0° C dans des conditions hypertoniques, et l’analyse cytométrique en flux de globules rouges intacts marqués à l’éosine-5′-maléimide (test de liaison à l’EMA)18 ont été proposés comme nouvelles méthodes d’identification de la sphérocytose héréditaire19. Ce dernier en particulier s’est révélé être un test de diagnostic sensible et spécifique de la sphérocytose héréditaire12,18,20-29 ciblant directement la lésion structurelle de cette maladie, puisque la sonde fluorescente, l’éosine-5′-maléimide, interagit avec le complexe protéique de la bande 3.30

La performance des tests de diagnostic direct ou indirect disponibles a été principalement évaluée individuellement et sur un nombre limité de cas. La sensibilité du test varie considérablement et chaque méthode ne parvient pas à identifier plusieurs patients atteints de sphérocytose héréditaire.4,6,12 Dans cette étude, nous avons comparé les performances des tests de liaison à l’EMA, de fragilité osmotique du sang frais et incubé induite par le NaCl, de GLT, d’AGLT et de Pink sur une série de 150 patients atteints de sphérocytose héréditaire regroupés selon le phénotype clinique et la lésion moléculaire, dans le but final de trouver la combinaison de tests associée au pouvoir diagnostique le plus élevé pour la sphérocytose héréditaire, y compris les cas les plus légers qui sont habituellement difficiles à diagnostiquer.

Conception et méthodes

Sujets

Plus de cent cinquante patients consécutifs atteints de sphérocytose héréditaire (79 hommes et 71 femmes, âge médian 26 ans, plage 0-79 ans) appartenant à 128 familles non apparentées ont été étudiés. Au moment de l’étude, 22 patients étaient splénectomisés et 128 non splénectomisés.

Tous les patients ont subi une évaluation clinique et physique et les tests de laboratoire suivants : numération globulaire complète, examen du frottis sanguin, numération des réticulocytes, dosage de la concentration de bilirubine et d’haptoglobine, évaluation du statut ferrique, test direct à l’antiglobuline (DAT), dépistage des hémoglobines anormales ou instables, test de fragilité osmotique au NaCl sur sang frais et incubé, GLT, AGLT, test de Pink et test de liaison à l’EMA. Dans certains cas, l’activité des enzymes les plus importantes de la voie glycolytique et de la voie du pentose phosphate a été étudiée. Chez quelques patients, le DAT31 stimulé par un mitogène a également été réalisé pour écarter le diagnostic d’anémie hémolytique DAT-négative.

La sphérocytose héréditaire a été diagnostiquée sur la base de signes cliniques et de laboratoire d’hémolyse chronique, de la présence de sphérocytes à l’examen du frottis de sang périphérique, de la positivité d’au moins un test de fragilité des globules rouges, d’antécédents familiaux de sphérocytose héréditaire le cas échéant, et de l’exclusion d’autres causes de sphérocytose secondaire19. L’anémie a été définie comme grave (Hb<8 g/dL), modérée (Hb 8-10 g/dL), légère (Hb>10 et <11,5 g/dL pour les femmes et Hb>10 et <13,5 g/dL pour les hommes) et compensée (Hb>11,5 g/dL pour les femmes et >13,5 g/dL pour les hommes).

Les échantillons de tous les patients ont été soumis à une électrophorèse sur gel de polyacrylamide au dodécylsulfate de sodium (SDS-PAGE) pour l’analyse des protéines de la membrane des globules rouges et divisés selon qu’il y avait un déficit de la bande 3, de la spectrine ou de l’ankyrine, un déficit combiné spectrine/ankyrine et aucun défaut détectable4.

Cinq cent soixante-quinze donneurs de sang sains et 84 cas d’anémie hémolytique autre que la sphérocytose héréditaire (17 avec anémie hémolytique auto-immune, 10 avec troubles enzymatiques des globules rouges, 10 avec elliptocytose héréditaire, 15 avec anémie dysérythropoïétique congénitale, 9 avec hémoglobinurie paroxystique nocturne, 3 avec stomatocytose, 3 avec anémie mécanique et 17 avec anémie de cause inconnue) ont également été étudiés.

Dossiers hématologiques

Le sang périphérique a été prélevé chez les patients et les témoins au cours des procédures de diagnostic après avoir obtenu le consentement éclairé et l’approbation du comité institutionnel de recherche humaine. Les procédures suivies étaient conformes aux normes éthiques internationales d’Helsinki sur l’expérimentation humaine. La grande majorité des échantillons ont été prélevés dans notre institut ; les échantillons prélevés dans d’autres centres ont été expédiés en maintenant une température de 4°C et ont toujours été traités dans les 24 h. Tous les tests ont été effectués sur un seul site. Aucun des patients n’avait été transfusé dans les 3 mois précédant l’étude. Les paramètres hématologiques ont été déterminés sur un analyseur hématologique automatisé (Automatic Beckman Coulter LH-750, CA, USA). Les examens hématologiques de routine ont été effectués selon Dacie & Lewis.32 Les taux de bilirubine, d’haptoglobine et de ferritine ont été déterminés à l’aide d’Integra 800 (Roche, Mannheim, Allemagne). Le nombre de sphérocytes dans le sang périphérique a été évalué par deux opérateurs indépendants et experts. La fragilité osmotique des globules rouges a été évaluée en réalisant le test de fragilité osmotique au NaCl sur du sang frais et incubé,6 le GLT standard,7 l’AGLT8 et le test de Pink9 sur des échantillons de chaque patient.

Le test de liaison à l’EMA a été réalisé comme décrit par King et al.18 avec des modifications mineures. En particulier, l’intensité de fluorescence, exprimée en tant que fluorescence médiane du canal, a été déterminée pour 10 000 événements dans le canal FL-1, à l’aide d’un cytomètre en flux FACSCanto II de Becton Dickinson (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA). La solution mère de colorant EMA a été stockée en petites aliquotes à -80° C sur une période de 6 mois. Le test a été réalisé une fois par semaine en regroupant tous les cas le même jour25 après avoir confirmé la reproductibilité des résultats sur des échantillons de sang conservés jusqu’à 6 jours à 4°C.

Afin de diminuer la variation intra-essai, les échantillons des patients ont été comparés à ceux de six témoins normaux. Les résultats ont été exprimés en pourcentage de réduction de la fluorescence de l’échantillon du patient par rapport à la fluorescence moyenne des six témoins normaux, comme proposé par Girodon et al.25 Une courbe caractéristique d’exploitation du récepteur (ROC) basée sur une analyse de régression logistique a été utilisée pour déterminer le seuil optimal entre les valeurs des patients atteints de sphérocytose héréditaire et celles des individus normaux. Selon l’analyse de la courbe ROC, la diminution optimale de la fluorescence pour séparer les sujets normaux des patients atteints de sphérocytose héréditaire était de 11%. Dans ces conditions, la spécificité du test calculée sur 575 sujets sains était de 98%.

Les fantômes de globules rouges ont été préparés dans les 24 heures suivant le prélèvement sanguin selon la méthode décrite par Dodge et al.33 avec de légères modifications.4 Les protéines membranaires des globules rouges ont été analysées dans les 15 jours suivant la préparation des fantômes par SDS-PAGE en utilisant un gradient d’acrylamide de 4% à 12% selon Fairbanks et al.34 et le système de tampon discontinu de Laemmli35 avec un gradient linéaire d’acrylamide de 6% à 14%, comme décrit précédemment.4 Les activités des enzymes des voies glycolytique et pentose phosphate ont été dosées selon les méthodes décrites par Beutler.36

Résultats

Le tableau 1 présente les données hématologiques et biochimiques des patients atteints de sphérocytose héréditaire regroupés selon qu’ils n’avaient pas été splénectomisés ou qu’ils l’avaient été avant le moment de l’étude, et selon le phénotype clinique (chez les patients non splénectomisés uniquement). La majorité des sujets non splénectomisés présentaient une hémolyse légère à compensée ; 18 % avaient très peu de sphérocytes (≤3 %). Les anomalies protéiques les plus fréquentes étaient les déficits en spectrine et en bande 3 chez les patients non splénectomisés et splénectomisés. Le défaut de la protéine de membrane était indétectable chez neuf (7 %) sujets non splénectomisés, dont sept avaient des antécédents familiaux positifs de sphérocytose héréditaire ; les deux autres présentaient une anémie légère, une réticulocytose et 5 % de sphérocytes, en l’absence d’autres causes d’anémie hémolytique chronique.

Le tableau 2 compare la sensibilité des tests de laboratoire diagnostiques de la sphérocytose héréditaire. La fixation de l’EMA n’a pas permis d’identifier 10/150 (7%) cas (4 avec un déficit de la bande 3, 5 avec un déficit de la spectrine et 1 avec un défaut non détecté). La diminution moyenne de la fluorescence était de 27 % ± 10 % chez les patients atteints de sphérocytose héréditaire contre 0 % ± 8 % chez les sujets de référence (P<0,001). Le pourcentage de réduction de la fluorescence était directement lié au nombre de sphérocytes et indirectement au volume corpusculaire moyen ; aucune corrélation n’a été trouvée avec la concentration d’hémoglobine, le nombre absolu de réticulocytes ou la largeur de distribution des globules rouges. La sensibilité du test était indépendante du type et de l’importance du défaut moléculaire, bien qu’elle ait été légèrement inférieure chez les patients présentant des défauts non détectés qui avaient la plus petite diminution médiane de la fluorescence (15 % contre 30 % et 28 % dans le cas d’un déficit en bande 3 et en spectrine, respectivement). Il convient de noter que la sensibilité du test de liaison à l’EMA était légèrement plus élevée chez les patients splénectomisés que chez les patients non splénectomisés (figure 1).

La sensibilité des différents tests de fragilité des globules rouges étudiés était très variable et généralement plus élevée chez les patients splénectomisés que chez les patients non splénectomisés atteints de sphérocytose héréditaire, et plus faible (à l’exception de l’AGLT) chez les patients présentant des défauts non détectés que chez ceux présentant des défauts détectables (tableau 2A). En ce qui concerne le test de fragilité osmotique au NaCl, la sensibilité était plus grande lorsqu’il était effectué sur du sang incubé que sur du sang frais. Dans l’ensemble, les tests de fragilité osmotique au NaCl (tant sur du sang frais que sur du sang incubé) avaient une sensibilité plus faible que les tests à base de glycérol, plus couramment utilisés. Parmi ces derniers tests, l’AGLT présentait la plus grande sensibilité, également dans les cas de défauts non détectés, comparable à celle du test de liaison à l’EMA.

Tableau 1.Données hématologiques et biochimiques des patients atteints de sphérocytose héréditaire regroupés selon qu’ils avaient ou non été splénectomisés.

Tous les patients atteints de sphérocytose héréditaire étaient positifs à au moins deux tests différents, à l’exception de deux patients (1 avec un déficit en bande 3 et 1 avec un déficit en spectrine) qui étaient positifs uniquement au test de liaison à l’EMA. Nous avons constaté que la combinaison de l’EMA et de l’AGLT permettait d’identifier tous les patients atteints de sphérocytose héréditaire (tableau 2B). En particulier, 133/150 (88%) des cas de sphérocytose héréditaire étaient EMA-positifs, AGLT-positifs, 7/150 (5%) étaient EMA-positifs, AGLT-négatifs et 10/150 (7%) étaient EMA-négatifs, AGLT-positifs.

Lorsque les performances des différents tests ont été analysées chez les patients non splénectomisés en fonction du phénotype clinique, la fixation de l’EMA, l’AGLT et le test de Pink ont conservé une sensibilité élevée dans les différents sous-ensembles cliniques, alors que la sensibilité du test de fragilité osmotique au NaCl sur sang frais et après incubation a nettement diminué dans les cas compensés (figure 1).

Les résultats de divers tests dans une série de 84 patients présentant des conditions hémolytiques autres que la sphérocytose héréditaire sont représentés dans la figure 2. La liaison EMA a montré la plus grande spécificité de la maladie étant négative chez tous les patients atteints d’anémie hémolytique auto-immune, même en présence d’une sphérocytose marquée.

Discussion

Il s’agit de la première étude comparative étendue des méthodes de laboratoire les plus utilisées actuellement pour le diagnostic de la sphérocytose héréditaire, réalisée sur un grand nombre de patients regroupés selon le défaut moléculaire, le degré d’hémolyse et la présence ou l’absence de la rate. Le fait que la moitié des patients examinés présentaient une anémie légère/compensée et étaient donc plus difficiles à diagnostiquer, et que 18% avaient très peu de sphérocytes sur le frottis de sang périphérique, rend la population examinée particulièrement adaptée aux études de sensibilité. Nous n’avons pas inclus le test de cryohémolyse17 dans cette étude car la base de la sensibilité des globules rouges de la sphérocytose héréditaire au refroidissement n’a pas été élucidée jusqu’à présent, et les opinions sur son utilisation systématique pour le diagnostic de la sphérocytose héréditaire sont controversées.4,5,16,17,19,37,38

Tableau 2.(A) Sensibilité des tests simples chez les patients atteints de sphérocytose héréditaire (SH) regroupés selon le défaut biochimique. (B) Sensibilité des tests combinés dans l’ensemble des cas de HS. Le nombre représente le rapport entre les cas positifs et les cas totaux avec les valeurs en pourcentage entre parenthèses.

Figure 1.Sensibilité de divers tests diagnostiques chez 22 patients splénectomisés et 128 patients non splénectomisés atteints de sphérocytose héréditaire (SH). Les patients non splénectomisés atteints de HS ont été divisés selon le phénotype clinique.

Parmi les méthodes diagnostiques considérées, le test de liaison à l’EMA récemment proposé est certainement le plus intéressant, et il est de plus en plus utilisé par les laboratoires spécialisés en raison de sa sensibilité et de sa spécificité élevées12,18,23.-29 Cette méthode cible directement la lésion structurelle de la maladie, puisque la sonde fluorescente éosine-5′-maléimide interagit avec les protéines transmembranaires bande 3, protéine Rh, glycoprotéine Rh et CD47 qui sont réduites dans les globules rouges des patients atteints de sphérocytose héréditaire;30 les défauts d’autres protéines du cytosquelette, comme la spectrine et la protéine 4.2, induisent également une diminution de l’intensité de la fluorescence, probablement parce qu’elles créent un effet de modulation à longue portée sur le site de liaison du colorant dans la protéine de la bande 3.39 La sensibilité du test de liaison à l’EMA dans cette série est plus élevée que celle récemment rapportée par Crisp et al,12 et similaire à celle trouvée par d’autres;18,23-29 de plus, la performance du test semble être indépendante du type de déficience en protéines de la membrane du globule rouge, et ne diminue que légèrement chez les patients atteints de sphérocytose héréditaire avec un défaut indétectable, conformément à ce qui a été observé par King et al,18 et Girodon et al.25 Il est intéressant de noter que la sensibilité est indépendante du phénotype clinique, étant également élevée chez les patients atteints d’anémie compensée. L’analyse séparée des patients non splénectomisés et splénectomisés atteints de sphérocytose héréditaire a montré que la sensibilité augmentait dans ce dernier groupe, un résultat généralement commun à tous les tests étudiés ; cette observation souligne la nécessité de définir précisément les caractéristiques cliniques des patients lors du test de performance des méthodes de diagnostic de la sphérocytose héréditaire, et éventuellement de limiter l’analyse aux sujets non splénectomisés. Un autre avantage du test de liaison à l’EMA est que les résultats ne sont pas influencés par l’expédition ou le stockage jusqu’à 6 jours, comme le montre la figure 3, permettant ainsi l’expédition d’échantillons comme le rapportent Girodon et al.25. De plus, les résultats ne sont pas affectés par des transfusions récentes puisque la méthode discrimine différentes populations de globules rouges.20

Figure 2.Résultats des tests diagnostiques individuels chez les patients atteints d’anémies hémolytiques autres que la sphérocytose héréditaire (SH), comparés à ceux atteints de SH. La zone ombrée représente les intervalles de référence normaux. ADC : anémie dysérythropoïétique congénitale ; AIHA : anémie hémolytique auto-immune ; HE : elliptocytose héréditaire ; PNH : hémoglobinurie paroxystique nocturne

En ce qui concerne les tests de fragilité osmotique au NaCl, nous avons constaté qu’ils n’ont pas permis d’identifier près d’un quart des patients atteints de sphérocytose héréditaire, ce qui confirme les résultats d’autres chercheurs,12,13,19,40,41 et que leur sensibilité était généralement inférieure à celle des autres tests de laboratoire diagnostiques évalués dans cette série. Malgré cela, la fragilité osmotique du NaCl incubé est encore communément considérée comme l’étalon-or pour le diagnostic de la sphérocytose héréditaire chez les patients présentant des anémies hémolytiques négatives de Coombs5,11,42. En effet, l’analyse de la littérature révèle qu’aucune étude systématique sur la sensibilité de ce test n’a été réalisée dans le passé, et que l’affirmation selon laquelle il s’agit de la meilleure méthode pour le diagnostic de la sphérocytose héréditaire est basée sur des études réalisées sur un nombre limité de patients dont les caractéristiques cliniques ne sont pas clairement définies ; de plus, l’interprétation des courbes de fragilité osmotique du NaCl peut être difficile dans les cas moins typiques.8 Le nombre élevé de patients considérés dans cette série nous a permis de corréler la performance du test de fragilité osmotique du NaCl avec l’expression clinique de la maladie : l’observation que, dans les cas de sphérocytose héréditaire compensée, la sensibilité des tests de fragilité osmotique a diminué à près de 60%, beaucoup plus que ce qui a été rapporté par Korones & Pearson,13 limite encore l’utilité de cette méthode dans les cas les plus légers et les moins typiques. Ceci est également confirmé par la constatation que la sensibilité chute à 30% chez les patients atteints de sphérocytose héréditaire avec un défaut biochimique indétectable.

Les tests de fragilité des globules rouges à base de glycérol, à l’exception de la version originale GLT, sont plus sensibles que le test de fragilité osmotique au NaCl ; en particulier, dans cette série, l’AGLT avait une sensibilité de 95%, similaire à celle trouvée par d’autres1,15,43,44 et supérieure à celle rapportée par Cynober et al.10 et Bucx et al.45 La sensibilité de l’AGLT était également élevée chez les cas compensés et chez ceux présentant un défaut biochimique non détecté. En outre, il convient de noter que l’AGLT a identifié les dix cas de sphérocytose héréditaire négatifs pour l’EMA.

L’association de la fixation de l’EMA et de l’AGLT a permis d’identifier tous les cas de sphérocytose héréditaire de cette série ; le cytomètre de flux n’étant pas disponible dans tous les laboratoires de diagnostic, il convient de mentionner que l’AGLT plus le test de fragilité osmotique au NaCl sur sang incubé porte la sensibilité diagnostique à 97%, similaire à celle précédemment rapportée dans une plus grande série de patients4 : dans tous les cas, cette valeur est supérieure à celle obtenue en combinant la fixation de l’EMA et le test de cryohémolyse, comme l’ont récemment rapporté Crisp et al.12

Figure 3.(A) Valeurs moyennes de fluorescence des canaux chez les témoins normaux et les patients atteints de sphérocytose héréditaire (SH) à différents jours de conservation. (B-C) Résultats du test de liaison à l’EMA dans des échantillons provenant de 150 patients atteints de HS, regroupés en fonction de l’expédition (B) et des jours de stockage avant le test (C). ■ Contrôles, – HS non expédié, ○ HS expédié.

Figure 4.Organigramme pour le diagnostic de laboratoire de la sphérocytose héréditaire (SH).

La spécificité de la maladie des tests de diagnostic de la sphérocytose héréditaire a été évaluée en incluant un grand groupe de patients présentant différents types d’anémie hémolytique qui peuvent présenter des caractéristiques morphologiques et de laboratoire similaires à celles de la sphérocytose héréditaire. Comme prévu, les résultats de la fixation de l’EMA, en termes de pourcentage de réduction de la fluorescence, étaient directement liés au nombre de sphérocytes uniquement chez les patients atteints de sphérocytose héréditaire, mais pas chez les patients atteints d’anémie hémolytique auto-immune, même chez ceux qui présentaient une sphérocytose marquée : cette observation est conforme à la haute spécificité de la maladie de ce test rapportée par d’autres19.-Nous avons constaté que les autres tests, en particulier ceux à base de glycérol, sont moins spécifiques que la fixation de l’EMA, puisque, comme indiqué précédemment,8,9,14,15,46 ils sont souvent positifs aussi dans les anémies hémolytiques acquises. Il convient de mentionner qu’aucun des tests diagnostiques disponibles pour la sphérocytose héréditaire, qu’ils soient directs ou indirects, ne permet de différencier la sphérocytose héréditaire de l’anémie dysérythropoïétique congénitale de type II. Cette dernière affection, bien que moins répandue que la sphérocytose héréditaire, peut imiter la présentation clinique, la morphologie des globules rouges et l’augmentation de la fragilité osmotique des globules rouges de la sphérocytose héréditaire et peut nécessiter une analyse SDS-PAGE pour être identifiée : Mariani et al. ont rapporté que 13 % des cas adressés à un laboratoire de référence avec l’étiquette provisoire de sphérocytose héréditaire se sont révélés être une anémie dysérythropoïétique congénitale de type II après examen par SDS-PAGE47.

Les directives de diagnostic de la sphérocytose héréditaire du British Committee for Standards in Hematology,19 les seules disponibles à ce jour, recommandent soit la fixation de l’EMA, soit le test de cryohémolyse comme méthode de dépistage,16 le facteur décisif pour le choix étant la disponibilité d’un cytomètre de flux. Les directives ne précisent pas si, en cas de résultats équivoques ou limites, les deux tests doivent être effectués. Quoi qu’il en soit, même l’association de ces deux tests donne une sensibilité de 93%, similaire à celle de la fixation de l’EMA ou de l’AGLT utilisés seuls, et bien inférieure à celle obtenue par l’association fixation de l’EMA plus AGLT.

Comme le montre la figure 4, en présence d’un patient présentant une hémolyse chronique avec sphérocytes DAT négatif, la négativité de l’EMA et de l’AGLT permet d’exclure une sphérocytose héréditaire. La positivité de la liaison EMA (avec une AGLT positive ou négative) conduit au diagnostic de sphérocytose héréditaire, sauf dans les cas non dominants avec une réticulocytose inadéquate11 qui nécessitent une analyse SDS-PAGE pour exclure une anémie dysérythropoïétique congénitale de type II. L’analyse SDS-PAGE peut également être nécessaire dans les rares cas EMA-négatifs, AGLT-poisitifs avec une histoire familiale négative, en raison de la moindre spécificité de la maladie de l’AGLT.

En conclusion, aucun test unique n’est capable d’identifier tous les cas de sphérocytose héréditaire. L’association de la liaison EMA, qui cible directement le défaut structurel de la sphérocytose héréditaire, et de l’AGLT, qui exploite le rapport surface/volume des globules rouges, nous a permis d’identifier tous les patients atteints de sphérocytose héréditaire dans cette série et, par conséquent, représente une stratégie diagnostique très efficace pour la sphérocytose héréditaire également dans les cas légers/compensés. Cependant, il faut souligner que le diagnostic de sphérocytose héréditaire est l’étape finale d’un bilan diagnostique basé non seulement sur les tests de laboratoire mais aussi sur l’examen clinique, les antécédents familiaux personnels et l’exclusion des causes possibles de sphérocytose secondaire.

Notes de bas de page

• Financement : ce travail a été soutenu par une subvention de la Fondation IRCCS Ca’ Granda Ospedale Maggiore Policlinico de Milan, RC2009 160/01 et le projet ENERCA III, CE 2008, convention n. 210.
• Auteurs et divulgationsLes informations fournies par les auteurs sur les contributions des personnes citées comme auteurs et dans les remerciements sont disponibles avec le texte intégral de cet article à www.haematologica.org.
• Les divulgations financières et autres fournies par les auteurs en utilisant le format uniforme de l’ICMJE (www.icmje.org) pour la divulgation des intérêts concurrents sont également disponibles sur www.haematologica.org.

• Reçu le 4 août 2011.
• Révision reçue le 11 octobre 2011.
• Acceptée le 26 octobre 2011.

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