2nd INTERNATIONAL CONFERENCE ON APPLIED MICROBIOLOGY AND BENEFICIAL MICROBES
OCTOBER 23-25, 2017 OSAKA, JAPAN
Yongjun Lee, Seungchan Cho, Dongjun Kim, Eui-Joon Ki, Kangsan Roh, Sang-Ho Cho, Sungrae Cho, Hee-Seong Byun, Haneul Seo, He Jiang, Hocheol Shin és Sukchan Lee
Sungkyunkwan University, Koreai Köztársaság
Poszterek & Elfogadott összefoglalók: Appli Micro
Abstract :
3D8 egyláncú változó fragmentum (scFv) rekombináns antitest. A 3D8 scFv változó nehézlánc-doménekből (VH) és változó könnyűlánc-doménekből (VL) áll, amelyeket rugalmas peptidlinker köt össze. A 3D8 scFv-t autoimmun-érzékeny MRL-lpr/lpr egérből izolálták. DNáz- és RNáz-aktivitással rendelkezik jelentős szekvencia-specifikusság nélkül. Caveola-mediált endocitózissal internalizálódik és a citoszolban halmozódik fel. Korábbi vizsgálatokban a WT 3D8 scFv vírusellenes hatást mutatott a pszeudorabies vírus (PRV) és az 1-es típusú herpes simplex vírus (HSV-1) ellen. A WT 3D8 scFv-hez hasonlóan a 3D8 VL is képes hidrolizálni a DNS- és RNS-szubsztrátokat, és a citoplazmába is behatol. Ebben a tanulmányban összehasonlítottam a 3D8 VL és a WT 3D8 scFv DNS- és RNS-hidrolizáló aktivitását. A 3D8 VL stabilitását különböző pH-tartományokban és hőmérsékleteken mértem FRET (fluoreszcencia rezonancia energia transzfer) assay segítségével. Megerősítettem továbbá a sejtmembránon keresztül a citoplazmába való behatolási aktivitást, és kimutattam, hogy a 3D8 VL-nek nincs citotoxikus hatása a WT 3D8 scFv által mutatott gazdasejtekkel szemben (in vitro). A 3D8 VL fehérjét több szervben (máj, tüdő és agy) és vérben is kimutattam, amikor a fehérjét peritoneális injekcióval beadtam egérbe. In vivo képalkotás segítségével megerősítettem, hogy a 3D8 scFv és a VL felszívódhatott a vérbe, majd az egész testben keringett, és végül több szervbe is eljutott. Az eredmények azt mutatják, hogy a 3D8 VL hasonló biokémiai és biológiai tulajdonságokkal rendelkezik, mint a WT 3D8 scFv. Összességében a 3D8 VL helyettesítheti a WT 3D8 scFv-t egy hatékony vírusellenes fehérjével.
Életrajz :
Yongjun Lee a Sungkyunkwan Egyetemen szerzett mesterdiplomát. Kutatási érdeklődése a vírusellenes fehérjével (3D8 scFv fehérje) foglalkozik E. coli expressziós rendszerek felhasználásával és a fehérjék vér-agy gátakon keresztüli transzportjával.