Összefoglaló
A szukrózsűrűséggradiens ultracentrifugálás hatékony technika olyan makromolekulák frakcionálására, mint a DNS, az RNS és a fehérjék. Ehhez a különböző méretű makromolekulák keverékét tartalmazó mintát egy olyan gradiens felületére rétegezzük, amelynek sűrűsége lineárisan nő fentről lefelé. A centrifugálás során a különböző méretű makromolekulák különböző sebességgel ülepednek le a gradiensben. A szedimentáció sebessége a centrifugális erőn kívül a makromolekulák méretétől, alakjától és sűrűségétől, valamint a gradiens sűrűségétől és viszkozitásától függ. Ily módon a makromolekulák méretük szerint különülnek el, a nagyobbak a gradiens aljára ülepednek, a könnyebbek pedig a gradiens tetejéhez közel maradnak. A módszer különösen sikeresnek bizonyult a nagy DNS-molekulák méretfrakcionálásában, és széles körben alkalmazták a DNS-törések indukciójának és javításának mérésére a klasztogén faktoroknak való kitettséget követően. Itt ennek a módszernek egy olyan adaptációját írjuk le, amely a DNS-replikáció során keletkező újonnan szintetizált DNS elemzésére használható. A naszcens DNS lúgos szacharóz gradiensben történő méretelemzésével mérhetők a replikációs aktivitás változásai, miután a sejteket DNS-károsító ágenseknek tették ki. A módszer különösen hasznos, mivel lehetővé teszi a DNS-károsodás által közvetített láncnyúlásra vs. replikonkezdeményezésre gyakorolt hatások megkülönböztetését, ami elengedhetetlen az S-fázison belüli ellenőrzőpont mélyreható elemzéséhez. Ez a képesség teszi a technikát egyedivé, és indokolja némileg munkaigényes jellegét.