Blueberry Supplementation Improves Memory in Older Adults | CDhistory

Procedure

A prospektív résztvevőket strukturált interjú eszközökkel értékelték, hogy meghatározzák a tanulmány felvételére való alkalmasságot. Az Academic and Medical History Questionnaire (20) segítségével demográfiai adatokat, valamint az iskolai végzettségre, a jelenlegi és korábbi egészségügyi állapotokra, valamint a gyógyszer- és szerhasználatra vonatkozó információkat gyűjtöttek. A cukorbetegségben, kábítószerrel való visszaélésben vagy diagnosztizált pszichiátriai vagy neurológiai betegségben szenvedőket kizárták, valamint azokat, akik olyan gyógyszereket szednek, amelyek befolyásolhatják az eredményméréseket, mint például a benzodiazepinek. A memóriazavar mértékét a Clinical Dementia Rating (CDR) segítségével határozták meg, amely a résztvevőtől és egy informátortól (általában házastárs vagy felnőtt gyermek) kér információt a kognitív hanyatlás jellegéről és mértékéről, ahogy az az otthoni és a közösségi mindennapi tevékenységekben megnyilvánul (21). A memória, a tájékozódás, a problémamegoldás, a közösségi ügyek, az otthoni tevékenységek és a személyes gondozás területeit értékelték, és az egyes területek értékelései hozzájárultak a CDR globális osztályozásához, amelyben a memória területe kapta a legnagyobb súlyt. A CDR-osztályozás a következőkre terjed ki: nincs károsodás, enyhe hanyatlás, enyhe, közepes és súlyos demencia. Az enyhe kognitív károsodásnak megfelelő enyhe hanyatlással rendelkező személyeket vettük fel a vizsgálatba, és kizártuk azokat, akiknél a CDR besorolása nem jelzett károsodást, valamint az enyhe, közepes és súlyos demenciával rendelkezőket. A globális CDR-besorolás mellett a dobozok pontszámának összegét is levezettük. Ez a pontszám a hat működési területre vonatkozó kategóriaértékelések számtani összegét jelentette, és a funkcionális hanyatlás általános szintjének számszerűsítésére szolgált (22).

A vad áfonyalevet a Van Dyk’s Health Juice Products Ltd (Caledonia, Nova Scotia, Kanada) készítette kereskedelmi forgalomban érett, fagyasztott vad (lowbush) áfonyából (Vaccinium angustifolium Aiton), és a kutatáshoz a Wild Blueberry Association of North America (Old Town, ME, USA) biztosította. A bogyókat felolvasztották, kipréselték, megszűrték, pasztőrözték, majd egyliteres borostyánszínű üvegekbe palackozták. Egy kg áfonyagyümölcsből körülbelül 735 ml egyszersült gyümölcslé készült.

A vizsgálatban használt gyümölcslé mintákon elemzéseket végeztek. A vad áfonyalében a legnagyobb mennyiségben oldott komponensek a glükóz, a fruktóz, valamint az alma- és citromsav voltak (23). A gyümölcslé összes fenoljának kolorimetriás mérése 2,38 g galluszsav-egyenérték/l koncentrációt mutatott (24). A gyümölcslében lévő fő fenolok a hidroxifahéjsav-észter, a klorogénsav körülbelül 734 mg/L, és a flavonoid antociánok 877 mg cianidin-3-glükozid-egyenérték/L gyümölcslé voltak a máshol leírt HPLC-analízis alapján (25). A tárolás során az áfonyalé antocián- és egyéb fenolvegyületeiben veszteségek léphetnek fel. A gyümölcslé minták körülbelül három hónapos tárolása során az összes fenol és az antociánok veszteségét 23%-ban, illetve 20%-ban határozták meg a borostyánszínű üvegekben, hűtve tárolt gyümölcslé esetében.

A napi fogyasztást 6 ml/kg és 9 ml/kg között tartották a testsúly alapján meghatározott adagolási ütemezéssel. Az 54 és 64 kg közötti egyéneknek 444 ml/nap, a 65 és 76 kg közötti egyéneknek 532 ml/nap, a 77 és 91 kg közötti egyéneknek pedig 621 ml/nap mennyiséget írtak elő. Az 1. táblázat tartalmazza a fenol- és antociánbevitelre vonatkozó adatokat, amelyeket a vizsgálatban használt áfonyalé mintáiból határoztak meg. Ez az adagolási tartomány megfelelt a Concord szőlőlével végzett humán vizsgálatokban használt mennyiségnek (19,26). A vizsgálatban résztvevők vakok voltak a kapott étrend-kiegészítővel kapcsolatban, és közölték velük, hogy a vizsgálati termék lehet szőlőlé, áfonyalé vagy egy bogyós placebo ital. A gyümölcslevet a kiosztás előtt 4 °C-os hűtőkamrában tárolták. A kísérleti személyeket arra utasították, hogy a gyümölcslevet otthon hűtsék le, és az előírt napi mennyiséget egyenlő, elosztott adagokban vegyék be a reggeli, déli és esti étkezéshez. A téves mérés kockázatának minimalizálása érdekében minden alany számára egyedi adagolással ellátott tárolóedényeket biztosítottunk. A beavatkozás időtartama 12 hét volt. Annak ellenére, hogy ez az embernél a teljes élettartamnak jóval kisebb százalékát jelentette, mint a rágcsálóknál, a korábbi humán és állatkísérletek közötti megfelelésre tekintettel arra számítottunk, hogy a biológiai válasz lényegében ugyanabban az időtartamban jelentkezik. Az áfonya hasonló időtartamú pótlása idős állatokkal végzett kísérletekben a kognitív teljesítmény javulását mutatta ki (12,14). Emellett a bogyós gyümölcslével végzett, ilyen időtartamú humán vizsgálatok kedvező változásokat mutattak ki a gyulladásos markerek és az antioxidáns kapacitás tekintetében (26).

A vizsgálati alanyok palackozott gyümölcslevet kaptak a kiindulási vizsgálaton és egy közbenső vizsgálaton a beavatkozás 6. hetében. A fogyasztási protokoll betartását és a mellékhatásokat heti telefonos kapcsolattartással és közvetlen interjúval értékelték az időközi és az utolsó látogatás során. Az alanyokat arra utasították, hogy a vizsgálat időtartama alatt kerüljék a bogyós gyümölcsöket, gyümölcsleveket és bogyós gyümölcskivonatokat, és kaptak egy listát a kerülendő élelmiszerekről és étrend-kiegészítőkről. Ez a lista többek között olyan gyümölcsöket és italokat tartalmazott, mint az áfonya, szeder, cseresznye, szőlő, szőlőlé, gránátalma, eper és bor.

Az értékelésekre a kezelés előtti kiindulási időpontban és a beavatkozás utolsó hetében került sor. Az elsődleges kimenetelek a memóriafunkció mérései voltak, beleértve a Verbális páros társas tanulási tesztet (V-PAL; 27) és a Kaliforniai verbális tanulási tesztet (CVLT; 28). A páros társas tanulási feladatokkal azonosították a progresszív neurodegenerációban szenvedőket, és érzékenységet mutattak a korai és előrehaladottabb Alzheimer-kórra (29), a V-PAL pedig érzékenynek bizonyult a fiatal, középkorú és idős nők közötti fejlődési teljesítményváltozásokra (30). Ebben a feladatban az alanynak új asszociációkat kell megtanulnia gyakori egy- és kétszótagú, szemantikailag nem összefüggő szavak (pl. segítség-évek) között. A V-PAL teljesítménypontszám a helyes válaszok kumulatív számát jelenti, négy tanulási és tesztelési próbán keresztül összegezve. A CVLT egy széles körben használt listatanulási és -felidézési feladat, amely érzékenységet mutatott az életkorral összefüggő memóriaváltozásokra, az MCI-re és a demenciára (31). Ez egy 16 tételből álló, gyakori szavakból álló listát tartalmaz, amelyek szemantikai kategóriákba sorolhatók. Az új asszociációk kódolására azonban nincs szükség. A szabad felidézési pontszámot a szólista megtartásának értékelésére használták. Mindkét verbális memóriatesztet azért vettük figyelembe, mert némileg eltérő kognitív követelményeket támasztanak. Míg a V-PAL új asszociációk kialakítását követeli meg, addig a CVLT az egyes szavak listájának elsajátítását és megtartását foglalja magában. Mindkettő a hippokampusz feldolgozására támaszkodik, bár a páros asszociációs feladat erőforrás-igényesebb lehet, és potenciálisan érzékenyebb a kognitív öregedés hatásaira (32).

Az egyes memóriafeladatok alternatív formáit használtuk az alap- és az utolsó látogatáskor, hogy a konkrét tesztelemek tartalma ne ismétlődjön. Az alternatív formák használata jelentősen mérsékli a teszt-reteszt konstrukciókkal kapcsolatos gyakorló hatásokat, különösen a memóriatesztek esetében (33). Az alternatív formák azonban nem biztos, hogy kiküszöbölik a procedurális gyakorlással, azaz a teszteljárással való ismerkedéssel kapcsolatos teljesítménynövekedést az újrateszteléskor (34).

A hangulatot a Geriatric Depression Scale (GDS; 35), egy 30 tételből álló, az idősebb felnőttek depressziós tüneteinek értékelésére szolgáló leltárral vizsgálták. Megmértük továbbá a testsúlyt és a derékkörfogatot, valamint éhgyomri vérmintát vettünk a Cincinnati Egyetem Általános Klinikai Kutatóközpontjának (GCRC) biokémiai laboratóriumában a szérum glükóz- és inzulinértékek meghatározásához.

Az elsődleges statisztikai elemzések függő mintás t-teszteket tartalmaztak annak meghatározására, hogy a kiindulási értéktől a végső látogatásig milyen változás történt a memória teljesítményében, a hangulatban, a test antropometriai jellemzőiben és a metabolikus paraméterekben. Az α 1-es típusú hiba valószínűségét 0,05-re állítottuk be, hogy statisztikailag szignifikáns hatásokról számoljunk be. Tekintettel a vizsgálat előzetes jellegére, α ≤ 0,10-nél jelentettünk tendenciákat. Ezen elemzésekhez Cohen d hatásméret-statisztikákat (36) is kiszámítottunk, amelyeket kis (0,2), közepes (0,5) és nagy (0,8) értékekkel jellemeztünk.

Az ismételt memóriatesztekkel kapcsolatos teljesítménynövekedéssel kapcsolatos aggodalmak miatt kovariancia-elemzéseket (ANCOVA) is végeztünk az esetleges eljárási gyakorlat hatásainak ellenőrzésére, összehasonlítva az áfonyás minta memóriateljesítményét a kísérő vizsgálatból származó szőlő placebó mintájával. Ezek az elemzések elkülönítették a beavatkozás hatását úgy, hogy függő mérőszámként a végső látogatás eredményének pontszámát, kovariáns mérőszámként pedig a kiindulási látogatás megfelelő pontszámát használták (37). A Cohen f (36) jelenti a hatásméret-statisztikát ezekre az elemzésekre, amelyek kis (0,1), közepes (0,25) és nagy (0,40) hatásméretűek.