Kedves szerkesztő,
A közelmúltban felmerült, hogy az Ellman-módszer nem elég pontos a kolinészterázok (ChE-k) aktivitásának mérésére (Komersová et al., 2007; Sinko et al., 2007; Pohanka et al., 2011; Dingova et al., 2014). Ezt a módszert először Ellman és munkatársai vezették be és írták le, és a tio-kolin-származék (acetil- vagy butiril) ChE-k általi (valódi vagy pszeudo) hidrolízisén és a keletkező tio-kolin 5,5′-ditiobisz-2-nitrobenzoesav (DTNB) tiolreagenssel történő reakcióján és az 5-tio-2-nitrobenzoesav (TNB) anion képződésén alapul. A TNB-ion abszorpciójának mérése 410 nm-en pszeudo-ChE és 440 nm-en retikulocitikus acetil-ChE esetén közvetve meghatározza a ChE-aktivitást (Ellman és mtsai., 1961). Egyes szerzők azt javasolták, hogy az indoxilacetát jobb szubsztrát, mint az acetiltiokolin (ATCH), mivel nem lép reakcióba az Ellman-módszerhez használt oxim-ellenanyagokkal és tiolokkal (Pohanka és mtsai., 2011). Ezenkívül a DTNB, amely instabil, kölcsönhatásba lép a mintában lévő szabad szulfhidrilcsoportokkal, és befolyásolhatja a kolinészteráz aktivitást (Dingova és mtsai., 2014). Más kutatók kimutatták, hogy az oximok reakcióba lépnek az ATCH-val (oximolízis), tio-kolin és következésképpen TNB-ion keletkezik (Sinko és mtsai., 2007). Néhány szerző azt is megemlítette, hogy ha a DTNB koncentrációja jóval nagyobb, mint az ATCH koncentrációja, az ATCH hidrolízisének sebessége csökken, ami alacsonyabb mért ChE-aktivitást eredményez (Komersová és mtsai., 2007).
Noha a fent említett problémák Ellman módszerével kapcsolatban elhangzottak, mindegyiknek megvan a maga logikus megoldása. Először is, a minta egyszerű megfelelő hígításával a mintában lévő tiol- és oximtartalmú vegyületek is felhígulnak, így a DTNB reakciójának mértéke ezekkel az anyagokkal jelentősen csökken (Mohammadi et al., 2017). Másodszor, az indoxilacetát és a TNB moláris csillapítási együtthatója 3900 M-1.cm-1 (Pohanka et al., 2011), illetve 13600 M-1.cm-1 (Ellman et al., 1961). Így a ChE-aktivitás DTNB-vel történő mérésének kimutatási határa körülbelül 3,5-szer alacsonyabb, mint az indoxilacetáté. Harmadszor, 0,2-0,598 mM DTNB-koncentráció esetén a legjobb DTNB/ATCH-koncentráció arány 1,25-3,74, ami az ATCH ChE általi hidrolízisének optimális sebességét eredményezi (Komersová et al., 2007).