Az endokannabinoid (EC) rendszer kulcsmolekuláinak, a 2-arachidonoil-glicerin (2AG) és az arachidonoil-etanolamid (anandamid, AEA) elemzése számos sajátossága miatt kihívást jelent. A 2AG spontán izomerizálódik biológiailag inaktív analógjává, az 1-arachidonoil-glicerollá (1AG) az acil-migráció révén, és csak kromatográfiailag különböztethető meg az 1AG-tól. A mátrixhatások, amelyeket elsősorban az együtt extrahált foszfolipidek okoznak, tovább ronthatják az analízist. Ezenkívül a 2AG és az 1AG bizonyos körülmények között, például az oldószer elpárolgása vagy a szárított kivonatok rekonstitúciója esetén instabil. Megvizsgáltuk a különböző szerves oldószerek és keverékeik, például toluol, etil-acetát és kloroform-metanol hatását a 2AG/1AG izomerizációjára, a 2AG/1AG stabilitására és a mátrixhatásokra a 2AG és az AEA UPLC-MS/MS analízisében emberi plazmában. A toluol megakadályozta mind a 2AG izomerizációját 1AG-vá, mind a 2AG/1AG degradációját a párolgás során. A toluolos kivonatok csak 2%-ban tartalmaznak mátrixhatást okozó plazmafoszfolipideket a hagyományosan használt kloroform-metanol oldószerkeverékből készült kivonatokhoz képest. A toluol és az összes többi vizsgált szerves oldószer hasonló 2AG és AEA extrakciós hozamot biztosít (60-80%). Ezekre a kedvező toluol tulajdonságokra alapozva kifejlesztettünk és validáltunk egy UPLC-MS/MS módszert pozitív elektrospray ionizációval (ESI+), amely lehetővé teszi a 2AG és az AEA egyidejű, pontos és precíz mérését a humán plazmában. Az UPLC-MS/MS módszert keresztvalidáltuk egy korábban leírt, teljes mértékben validált GC-MS/MS módszerrel az AEA humán plazmában történő kimutatására. Az UPLC-MS/MS (y) és GC-MS/MS (x) módszerekkel kapott eredmények között szoros korrelációt (r(2)=0,821) figyeltünk meg (y=0,01+0,85x). Az UPLC-MS/MS módszer alkalmas a 2AG és az AEA rutinszerű mérésére emberi plazmamintákban (1 ml) klinikai körülmények között, amint azt a 100 napon keresztül feldolgozott minőségellenőrző plazmaminták mutatták. Az UPLC-MS/MS módszert kiterjesztettük humán vizeletre is. A vizeletben az AEA nem volt kimutatható, és a 2AG csak 3 egészséges személy 19 mintája közül volt kimutatható 160, 180 és 212 pM értéken, ami 12,3, 14,5 és 9,9 pmol/mmol kreatininnek felel meg.