Team:Cambridge/Protocols/Acetone Precipitation of Proteins

Back to Protocols

• 1 Aceton precipitation of proteins
  • 1.1 Theory
  • 1.2 Gyakorlat
  • 1.3 Biztonság

Fehérjék acetonos kicsapása

A fehérjetisztítás után el kell távolítani az elúciós pufferekből visszamaradt vegyszereket, és koncentrálni kell a fehérjemintát, hogy lehetővé váljon a további feldolgozás.

Elmélet

A fehérjék acetonban nem oldódnak (különösen alacsony hőmérsékleten), míg sok olyan kismolekula, amely zavarhatja a fehérjék későbbi feldolgozását, oldható. A fehérjék ebben az oldószerben történő kicsapásával eltávolíthatja a puffer szennyeződéseket és a fehérjéket pelletbe koncentrálhatja, amely más oldószerekkel újra feloldható.

Gyakorlat

1. Kb. 30 perccel a kezdés előtt hűtse le a kicsapni kívánt fehérjeoldat térfogatának négyszeresét az acetonból egy -20-as fagyasztóban.
2. Öntse a fehérjemintát a centrifugacsövekbe a pultos centrifugához.
3. Adjon hideg acetont a fehérjemintához.
4. Vortexelje a csöveket a keveréshez.
5. Inkubálja 60 percig -20-on.
6. Centrifugálja 10 percig 13 000 xG-n
7. Dekantálja a felülúszót – próbálja meg nem megzavarni a pelletet.
8. Hagyja a csövek fedelét levenni, hogy a maradék aceton elpárologhasson.
9. Oldja fel újra bármilyen pufferben, amit a downstream folyamatok igényelnek.

Biztonság