Rispetto ad altri formati di anticorpi come IgG, frammenti Fab o scFvs, i domini VHH hanno molte proprietà e vantaggi unici.
In primo luogo, con solo tre loop CDR e una tendenza a lunghe sequenze CDR3, i VHH coprono uno spazio epitopo diverso, ma sovrapposto, rispetto alle IgG tradizionali. In generale, sembra esserci una tendenza a legarsi a epitopi conformazionali nativi e discontinui piuttosto che a epitopi peptidici lineari. Le eccezioni sono l’anti-Spot-Tag VHH e l’anti-Myc VHH di ChromoTek, che riconoscono rispettivamente piccoli tag peptidici lineari.
Le VHH possono essere prodotte in una varietà di sistemi di espressione diversi, che vanno dai batteri al lievito alle cellule di mammifero. Proprio come le IgG convenzionali, possono essere etichettate con una varietà di coloranti (fluorescenti), biotina o altre piccole molecole. Inoltre, possono essere covalentemente attaccate a superfici, come perline di agarosio o altre matrici. Inoltre, la funzionalizzazione sito-diretta e l’attaccamento stechiometrico dell’etichetta è possibile.
A causa delle loro piccole dimensioni (circa 12-15 kDa) e della struttura a catena singola, i VHH sono adatti per applicazioni per le quali le grandi dimensioni delle IgG convenzionali a quattro catene peptidiche (150 kDa) sono svantaggiose, come la microscopia a super risoluzione, la penetrazione dei tessuti o le tecniche basate su FRET ed ECL.
Importante, i domini VHH sono perfettamente adatti a generare formati di anticorpi bispecifici, sia per fusione genetica che per coniugazione con altri anticorpi ricombinanti. Anche in questo caso, le loro piccole dimensioni, l’alta stabilità e la buona esprimibilità sono vantaggiose per la generazione di molecole bi- o addirittura multispecifiche.
Inoltre, e in contrasto con le IgG complete, alcuni VHH possono essere espressi geneticamente a livello intracellulare e legarsi alle loro rispettive proteine bersaglio intracellulari. Quando fusi a proteine fluorescenti come GFP o RFP, questi sdAbs possono essere utilizzati per la visualizzazione intracellulare delle strutture bersaglio endogene in vivo. ChromoTek offre una varietà di tali fusioni VHH-FP, chiamate Chromobodies, ad esempio per la visualizzazione in vivo di actina, PCNA, la lamina nucleare e altre strutture citoscheletriche o nucleari.