Durante il processo di guarigione dopo la frattura dell’osso, il callo morbido si forma adiacente al sito della frattura, viene sostituito dal callo duro, e infine viene rimodellato alla configurazione originale dell’osso. Sebbene sia stato riportato che lo strato di cambium del periostio svolge un ruolo essenziale nella formazione del callo, mancano ancora prove dirette in vivo di questo. Per studiare il lignaggio cellulare del callo molle, abbiamo analizzato il processo di guarigione delle fratture in Prx1-Cre;ROSA26 reporter (R26R), Col1a1(3.6 kb)-Cre;R26R, Col1a1(2.3 kb)-Cre;R26R, Sox9-CreERT2;R26R, e Sox9-LacZ topi con colorazione X-gal. Nel Prx1-Cre;R26R, in cui le cellule del periostio macchiato per X-gal prima della frattura, tutte le cellule nel callo molle erano X-gal positivo, mentre nei topi Col1a1(3.6 kb)-Cre;R26R, le cellule del periostio prima della frattura macchiato per X-gal e il callo molle era parzialmente composto da X-gal-positive cellule. Al contrario, nei topi Col1a1(2.3 kb)-Cre;R26R, in cui gli osteoblasti maturi nello strato di cambium del periostio erano marcati prima della frattura, nessuna cellula nel callo molle al sito di frattura era X-gal positiva. Questi risultati suggeriscono che la maggior parte delle cellule nel callo molle derivano dai progenitori mesenchimali nel periostio e non da cellule osteoblastiche mature. È interessante notare che nei topi Sox9-LacZ, le cellule X-gal-positive che esprimono Sox9 sono emerse nel periostio adiacente al sito di frattura 3 giorni dopo la frattura. Abbiamo dimostrato questo iniettando tamoxifene nei topi Sox9-CreERT2;R26R per 3 giorni dopo la frattura, in modo che queste cellule periostee che esprimono Sox9 hanno dato origine a cellule nei calli molli e duri. I nostri risultati mostrano che le cellule periostee in cui l’espressione di Sox9 è indotta subito dopo la frattura sono la fonte principale dei condrociti e degli osteoblasti nel callo da frattura.