Blueberry Supplementation Improves Memory in Older Adults | CDhistory

Procedura

I partecipanti potenziali sono stati valutati con strumenti di intervista strutturata per determinare l’idoneità all’inclusione dello studio. L’Academic and Medical History Questionnaire (20) è stato usato per ottenere informazioni demografiche e informazioni riguardanti i risultati accademici, le condizioni mediche attuali e passate e l’uso di farmaci e sostanze. Le persone con diabete, disturbi da abuso di sostanze o condizioni psichiatriche o neurologiche diagnosticate sono state escluse, così come quelle che usavano farmaci che potevano influenzare le misure di risultato, come le benzodiazepine. Il livello di deterioramento della memoria è stato determinato con il Clinical Dementia Rating (CDR), che raccoglie informazioni dal partecipante e da un informatore (in genere, coniuge o figlio adulto) riguardo alla natura e all’entità del declino cognitivo come si manifesta nelle attività quotidiane a casa e nella comunità (21). I domini memoria, orientamento, risoluzione dei problemi, affari della comunità, attività domestiche e cura personale sono stati valutati, e le valutazioni per ogni dominio hanno contribuito a una classificazione globale CDR con il dominio memoria pesato maggiormente. Le classificazioni CDR includono nessun deterioramento, declino lieve e demenza lieve, moderata e grave. Abbiamo arruolato individui con un declino lieve corrispondente al deterioramento cognitivo lieve ed escluso quelli con classificazioni CDR che non indicano alcun deterioramento e quelli con demenza lieve, moderata e grave. Oltre alla classificazione globale CDR, è stato derivato anche il punteggio della somma delle caselle. Questo punteggio rappresentava la somma aritmetica delle valutazioni delle categorie nei sei domini di funzionamento e serviva come mezzo per quantificare il livello complessivo di declino funzionale (22).

Il succo di mirtillo selvatico è stato preparato commercialmente da mirtilli selvatici (lowbush) maturi e congelati (Vaccinium angustifolium Aiton) da Van Dyk’s Health Juice Products Ltd (Caledonia, Nova Scotia, Canada) ed è stato fornito per questa ricerca dalla Wild Blueberry Association of North America, Old Town, ME, USA. Le bacche sono state scongelate, pressate, filtrate, pastorizzate e poi imbottigliate in bottiglie di vetro ambrato da un litro. Un kg di frutti di mirtillo ha prodotto circa 735 mL di succo monodose.

Le analisi sono state effettuate su campioni del succo utilizzato in questo studio. I componenti disciolti più abbondanti nel succo di mirtillo selvatico erano glucosio, fruttosio e acido malico e citrico (23). La misurazione colorimetrica dei fenoli totali del succo ha indicato una concentrazione di 2,38 g di acido gallico equivalente/L (24). I maggiori fenoli nel succo erano l’estere dell’acido idrossicinnamico, l’acido clorogenico a circa 734 mg/L, e gli antociani flavonoidi a 877 mg di cianidina 3-glucoside equivalenti/L succo basati su analisi HPLC come descritto altrove (25). Le perdite di antociani e di altri fenoli nel succo di mirtillo possono verificarsi durante la conservazione. Durante i circa tre mesi di conservazione dei campioni di succo, le perdite di fenoli totali e di antociani sono state determinate al 23% e al 20%, rispettivamente, per il succo conservato sotto refrigerazione in bottiglie d’ambra.

Il consumo giornaliero è stato mantenuto tra 6 mL/kg e 9 mL/kg utilizzando uno schema di dosaggio determinato dal peso corporeo. Agli individui che pesavano da 54 a 64 kg sono stati prescritti 444 mL/giorno, quelli che pesavano da 65 a 76 kg hanno consumato 532 mL/giorno e quelli che pesavano da 77 a 91 kg hanno consumato 621 mL/giorno. La tabella 1 contiene i dati sull’assunzione di fenoli e antociani determinati da campioni di succo di mirtillo utilizzati in questo studio. Questo intervallo di dosaggio corrispondeva al volume utilizzato negli studi sull’uomo con il succo d’uva Concord (19,26). I partecipanti allo studio erano ciechi rispetto all’integratore ricevuto e gli è stato detto che il prodotto dello studio poteva essere succo d’uva, succo di mirtillo o una bevanda placebo ai frutti di bosco. Il succo è stato conservato in una cella frigorifera a 4 °C prima della distribuzione. I soggetti sono stati istruiti a refrigerare il succo a casa e ad assumere le quantità giornaliere prescritte in dosi uguali e divise con i pasti del mattino, di mezzogiorno e della sera. Abbiamo fornito contenitori con dosaggi individuali contrassegnati per ogni soggetto per minimizzare il rischio di misurazioni errate. Il periodo dell’intervento è stato di 12 settimane. Nonostante il fatto che questo rappresentasse una percentuale molto più piccola della durata totale della vita per gli esseri umani che per i roditori, ci aspettavamo che la risposta biologica si sarebbe verificata sostanzialmente nello stesso lasso di tempo in considerazione della corrispondenza tra precedenti studi umani e animali. L’integrazione di mirtillo per tempi simili in esperimenti con animali anziani ha dimostrato miglioramenti delle prestazioni cognitive (12,14). Inoltre, studi umani di questa durata con succo di bacche hanno mostrato cambiamenti benefici nei marcatori infiammatori e nella capacità antiossidante (26).

I soggetti hanno ricevuto del succo in bottiglia alla visita iniziale e ad una visita intermedia durante la settimana 6 dell’intervento. L’aderenza al protocollo di consumo e gli effetti collaterali sono stati valutati con contatti telefonici settimanali e tramite intervista diretta durante le visite intermedie e finali. I soggetti sono stati istruiti ad evitare i frutti e i succhi di frutta e gli estratti di bacche per tutta la durata dello studio e hanno ricevuto una lista di alimenti e integratori da evitare. Questa lista includeva frutta e bevande come mirtilli, more, ciliegie, uva, succo d’uva, melograni, fragole e vino tra gli altri.

Le valutazioni sono state effettuate al basale pre-trattamento e durante l’ultima settimana dell’intervento. I risultati primari erano misure della funzione della memoria, tra cui il Verbal Paired Associate Learning Test (V-PAL; 27) e il California Verbal Learning Test (CVLT; 28). I compiti di associazione accoppiata hanno identificato i soggetti con neurodegenerazione progressiva e hanno dimostrato sensibilità alla malattia di Alzheimer precoce e più avanzata (29), e il V-PAL ha dimostrato di essere sensibile ai cambiamenti di performance nello sviluppo tra donne giovani, di mezza età e anziane (30). Questo compito richiede che il soggetto impari nuove associazioni tra parole comuni di una o due sillabe semanticamente non correlate (per esempio, aiuto-anni). Il punteggio della performance V-PAL rappresenta il numero cumulativo di risposte corrette sommate attraverso quattro prove di apprendimento e di test. Il CVLT è un compito di apprendimento e richiamo di liste ampiamente utilizzato che ha dimostrato sensibilità ai cambiamenti di memoria legati all’età, MCI e demenza (31). Si tratta di una lista di 16 voci di parole comuni che possono essere raggruppate in categorie semantiche. Tuttavia, non vi è alcuna richiesta di codificare nuove associazioni. Il punteggio di richiamo libero è stato utilizzato per valutare la ritenzione dell’elenco di parole. Entrambi questi test di memoria verbale sono stati inclusi perché inducono richieste cognitive un po’ diverse. Mentre il V-PAL richiede la formazione di nuove associazioni, il CVLT comporta l’acquisizione e la conservazione di un elenco di parole individuali. Entrambi si basano sull’elaborazione dell’ippocampo, anche se il compito di associazione accoppiata può essere più intensivo di risorse e potenzialmente più sensibile agli effetti dell’invecchiamento cognitivo (32).

Le forme alternative di ciascun compito di memoria sono state utilizzate nelle visite di base e finali in modo che il contenuto specifico dell’elemento del test non fosse ripetuto. L’uso di forme alternative attenua sostanzialmente gli effetti di pratica associati ai disegni di test-retest, in particolare per quanto riguarda i test di memoria (33). Tuttavia, le forme alternative non possono eliminare il guadagno di prestazioni al re-test legato agli effetti di pratica procedurale, cioè la familiarità con la procedura del test (34).

L’umore è stato valutato con la Geriatric Depression Scale (GDS; 35), un inventario di 30 voci progettato per valutare i sintomi della depressione negli adulti anziani. Abbiamo anche misurato il peso e la circonferenza della vita e ottenuto campioni di sangue a digiuno per la determinazione dei valori di glucosio e insulina nel siero dal laboratorio di biochimica del General Clinical Research Center (GCRC) dell’Università di Cincinnati.

Le analisi statistiche primarie comprendevano test t a campione dipendente per determinare il cambiamento dal basale alla visita finale nelle prestazioni di memoria, umore, antropometria del corpo e parametri metabolici. Abbiamo impostato α probabilità di errore di tipo 1 a 0,05 per segnalare effetti statisticamente significativi. Data la natura preliminare di questo studio, abbiamo riportato le tendenze a α ≤ 0,10. Abbiamo anche calcolato le statistiche di Cohen’s d effect size (36) per queste analisi, che sono caratterizzate come piccole (0,2), medie (0,5), e grandi (0,8).

A causa della preoccupazione per l’aumento delle prestazioni con test di memoria ripetuti, abbiamo anche eseguito analisi di covarianza (ANCOVA) per controllare i potenziali effetti di pratica procedurale, confrontando le prestazioni di memoria del campione di mirtillo con quelle del campione placebo di uva dallo studio di accompagnamento. Queste analisi hanno isolato l’effetto dell’intervento usando i punteggi dei risultati della visita finale come misura dipendente e il punteggio corrispondente della visita di base come misura covariata (37). La f di Cohen (36) rappresenta la statistica della dimensione dell’effetto per queste analisi, che sono piccole (0,1), medie (0,25) e grandi (0,40).