Team:Cambridge/Protocols/Acetone Precipitation of Proteins

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• 1 Acetone precipitazione delle proteine
  • 1.1 Teoria
  • 1.2 Pratica
  • 1.3 Sicurezza

Precipitazione con acetone delle proteine

Dopo la purificazione delle proteine è necessario rimuovere le sostanze chimiche trattenute dai buffer di eluizione e concentrare il campione di proteine per consentire la lavorazione a valle.

Teoria

Le proteine sono insolubili in acetone (in particolare a basse temperature) mentre molte piccole molecole che potrebbero interferire con il lavoro a valle delle proteine sono solubili. Facendo precipitare le proteine in questo solvente è possibile rimuovere il contaminante del buffer e concentrare le proteine in un pellet che può essere ridissolto da altri solventi.

Pratica

1. Circa 30 minuti prima di iniziare, raffreddare un campione di acetone 4 volte il volume della soluzione di proteine che si desidera precipitare in un congelatore -20.
2. Versare il campione di proteine in provette per la centrifuga da banco.
3. Aggiungi acetone freddo al campione proteico.
4. Vortex tubi per mescolare.
5. Incubare per 60 minuti a -20.
6. Centrifuga per 10 minuti a 13 000 xG
7. Decantare surnatante – cercare di non disturbare il pellet.
8. Lasciare i coperchi delle provette per far evaporare l’acetone rimanente.
9. Ridisciogliere in qualsiasi tampone richiesto dai processi a valle.

Sicurezza