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エルマン法は今でもコリンエステラーゼ活性測定に適した方法である | CDhistory

Posted on 4月 23, 2021 by admin

編集部様、

最近、エルマン法はコリンエステラーゼ(ChEs)活性測定に十分な精度がないとの議論があります(Komerováら、2007;Sinkoら、2007;Pohankaら、2011;Dingovaら、2014)。 この方法は、Ellmanらによって初めて紹介・記述され、ChEs(真または偽)によるチオコリン誘導体(アセチルまたはブチリル)の加水分解と、得られたチオコリンとチオール試薬5,5′-ジチオビス-2-ニトロ安息香酸(DTNB)の反応および5-チオ-2-ニトロ安息香酸(TNB)アニオンの生成に基づいています。 擬似ChEでは410nm、網状アセチル-ChEでは440nmのTNBイオン吸収を測定することで間接的にChE活性を決定する(Ellmanら, 1961)。 インドキシルアセテートは、オキシム系解毒剤やEllman法に用いるチオールと反応しないため、アセチルチオコリン(ATCH)よりも優れた基質であると提案する著者もいる(Pohankaら, 2011)。 さらに、不安定なDTNBは、試料中の遊離スルフヒドリル基と相互作用し、コリンエステラーゼ活性に影響を与える可能性があります(Dingova et al.、2014)。 他の研究者は、オキシムがATCHと反応し(オキシモリシス)、チオコリン、ひいてはTNBイオンを生成することを示した(Sinko et al.、2007)。 また、DTNBの濃度がATCHの濃度よりはるかに高い場合、ATCHの加水分解速度が低下し、その結果、測定されたChE活性が低くなることを述べた著者もいる(Komersováら、2007年)。

以上のようにEllmanの方法には問題点が指摘されているが、それぞれ論理的な解決法がある。 まず、試料を単純に適切に希釈することにより、試料中のチオールおよびオキシム含有化合物も希釈され、したがってDTNBとこれらの物質との反応の程度はかなり減少する(Mohammadi et al.,2017)。 次に、インドキシルアセテートとTNBのモル減衰係数は、それぞれ3900 M-1.cm-1 (Pohanka et al., 2011) と13600 M-1.cm-1 (Ellman et al., 1961) である。 したがって、DTNBによるChE活性測定の検出限界は、インドキシルアセテートによる測定限界の約3.5倍である。 第三に、DTNB濃度が0.2-0.598 mMの場合、DTNB/ATCH濃度の最適な比率は、ChEによるATCH加水分解速度が最適になる1.25-3.74である(Komerováら、2007)

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