De 21-hydroxylase auto-antilichaam (21-OH Ab) ELISA kit is uitsluitend bedoeld voor gebruik door professionele personen, voor de kwantitatieve bepaling van 21-OH Ab in menselijk serum. Auto-immuunvernietiging van de bijnierschors is de meest voorkomende oorzaak van de ziekte van Addison en auto-antilichamen tegen het bijnierspecifieke enzym steroïde 21-hydroxylase zijn belangrijke markers van bijnierauto-immuniteit. Dit kan het geval zijn als de ziekte zich presenteert als de ziekte van Addison of als onderdeel van de auto-immuun polyglandulaire syndromen (APS) type I of type II.
In de 21-OH Ab ELISA kit, worden 21-OH Ab in de sera van patiënten, kalibratiemiddelen en controles in staat gesteld om te interageren met 21-OH gecoat op ELISA plaat wells. Na een incubatie van 16-20 uur worden de monsters weggegooid, zodat 21-OH Ab gebonden blijft aan het 21-OH dat op de putjes is gecoat. In een tweede incubatiestap wordt 21-OH-Biotine toegevoegd, waarbij door de tweeledige werking van 21-OH Ab een brug wordt gevormd tussen het op de plaat geïmmobiliseerde 21-OH en 21-OHBiotine. De hoeveelheid gebonden 21-OH-Biotine wordt vervolgens bepaald in een derde incubatiestap waarbij streptavidineperoxidase (SA-POD) wordt toegevoegd, dat zich specifiek aan biotine bindt. Overtollig, ongebonden SA-POD wordt vervolgens weggespoeld en toevoeging van het peroxidasesubstraat 3,3′,5,5′-tetramethlybenzidine (TMB) resulteert in de vorming van een blauwe kleur. Deze reactie wordt gestopt door toevoeging van een stopoplossing, waardoor de inhoud van de wells geel wordt. De absorptie van het gele reactiemengsel bij 450nm en 405nm wordt vervolgens afgelezen met een ELISA-plaatlezer. Een hogere extinctie wijst op de aanwezigheid van 21-OH Ab in het testmonster. Aflezen bij 405nm maakt kwantificering van hoge absorpties mogelijk. Aanbevolen wordt waarden onder 1 U/ml te meten bij 450nm. Als het mogelijk is slechts op één golflengte af te lezen, kan 405nm worden gebruikt. Het meetinterval is 0,3 – 100 U/ml (arbitraire eenheden).