Het potentiële gebruik van geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs) in gepersonaliseerde regeneratieve geneeskunde toepassingen kan worden vergroot door transgenics, inclusief de expressie van constitutieve cellabels, differentiatie reporters, of modulatoren van ziektefenotypes. Er is dus een precedent voor reproduceerbare transgene expressie onder iPSC-subklonen met isogene of diverse genetische achtergronden. Bij gebruik van virus- of transposonvectoren zijn transgeenintegratiesites en -exemplaren moeilijk te controleren en bijna onmogelijk te reproduceren over meerdere cellijnen. Bovendien zijn willekeurig geïntegreerde transgenen vaak onderhevig aan pleiotrope positie-effecten als gevolg van epigenetische veranderingen die inherent zijn aan differentiatie, waardoor toepassingen in iPSC’s worden ondermijnd. Om dit aan te pakken, hebben wij populaire TALEN en CRISPR/Cas9 nuclease technologieën aangepast om transgenen te introduceren in vooraf gedefinieerde loci en willekeurige positie-effecten te ondervangen. AAVS1 is een voorbeeldig locus binnen het PPP1R12C gen dat robuuste expressie van CAG promoter-gedreven transgenen mogelijk maakt. Gen targeting controleert het transgene kopie getal zodanig dat reporter expressie patronen reproduceerbaar zijn en schaalbaar met ∼2-voud. Bovendien blijft de genexpressie behouden gedurende lange-termijn humane iPSC kweek en in vitro differentiatie langs meerdere lineages. Hier schetsen we onze AAVS1 targeting protocol met behulp van gestandaardiseerde donor vectoren en constructie methoden, evenals praktische overwegingen voor iPSC cultuur, medicijn selectie, en genotypering.