Tijdens het genezingsproces na een botfractuur vormt zich zacht eelt naast de plaats van de fractuur, dat wordt vervangen door hard eelt, en uiteindelijk wordt omgevormd tot de oorspronkelijke botconfiguratie. Hoewel de cambiumlaag van het periosteum een essentiële rol zou spelen in de vorming van callus, ontbreekt het ons nog steeds aan rechtstreeks in vivo bewijs hiervan. Om de cellijn van de zachte callus te onderzoeken, analyseerden we het proces van fractuurgenezing in Prx1-Cre;ROSA26 reporter (R26R), Col1a1(3.6 kb)-Cre;R26R, Col1a1(2.3 kb)-Cre;R26R, Sox9-CreERT2;R26R, en Sox9-LacZ muizen met X-gal kleuring. In de Prx1-Cre;R26R muizen, waarbij de cellen van het periosteum voor de breuk gekleurd waren voor X-gal, waren alle cellen in de zachte callus X-gal positief, terwijl in de Col1a1(3.6 kb)-Cre;R26R muizen de cellen in het periosteum voor de breuk gekleurd waren voor X-gal en de zachte callus gedeeltelijk bestond uit X-gal-positieve cellen. In de Col1a1(2.3 kb)-Cre;R26R muizen daarentegen, waar de rijpe osteoblasten in de cambiumlaag van het periosteum voor de breuk werden gemarkeerd, waren geen cellen in de zachte callus op de breukplaats X-gal-positief. Deze resultaten suggereren dat de meeste cellen in de zachte callus afkomstig zijn van de mesenchymale progenitors in het periost, en niet van rijpe osteoblastische cellen. Interessant is dat in de Sox9-LacZ muizen, Sox9-expresserende X-gal-positieve cellen tevoorschijn kwamen in het periosteum grenzend aan de breukplaats, 3 dagen na de breuk. We toonden dit aan door tamoxifen te injecteren in de Sox9-CreERT2;R26R muizen gedurende 3 dagen na de breuk, zodat deze Sox9-expresserende periosteale cellen aanleiding gaven tot cellen in de zachte en harde calli. Onze bevindingen tonen aan dat de periostale cellen waarin Sox9 expressie wordt geïnduceerd net na de breuk de belangrijkste bron zijn van de chondrocyten en osteoblasten in de breuk callus.