Geachte redacteur,
Er is onlangs betoogd dat de methode van Ellman niet nauwkeurig genoeg is voor het meten van cholinesterase-activiteiten (ChE’s) (Komersová et al., 2007; Sinko et al., 2007; Pohanka et al., 2011; Dingova et al., 2014). Deze methode werd voor het eerst geïntroduceerd en beschreven door Ellman en zijn collega’s en is gebaseerd op hydrolyse van een thiocholine-derivaat (acetyl- of butyryl) door ChE’s (echte of pseudo) en reactie van het resulterende thiocholine met thiolreagens 5,5′-dithiobis-2-nitrobenzoëzuur (DTNB) en vorming van 5-thio-2-nitrobenzoëzuur (TNB)-anion. Meting van de absorptie van het TNB-ion bij 410 nm voor pseudo-ChE en 440 nm voor reticulocytisch acetyl-ChE bepaalt indirect de ChE-activiteit (Ellman et al., 1961). Sommige auteurs stelden voor dat indoxylacetaat een beter substraat is dan acetylthiocholine (ATCH), omdat het niet reageert met oxime antidota en thiol dat gebruikt wordt voor de methode van Ellman (Pohanka et al., 2011). Bovendien heeft DTNB, dat instabiel is, een wisselwerking met vrije sulfhydrylgroepen in het monster, en kan het de cholinesteraseactiviteit beïnvloeden (Dingova et al., 2014). Andere onderzoekers toonden aan dat oximen reageren met ATCH (oximolyse), waarbij thiocholine en bijgevolg TNB-ion wordt geproduceerd (Sinko et al., 2007). Sommige auteurs vermeldden ook dat wanneer de concentratie DTNB veel hoger is dan de concentratie ATCH, de hydrolysesnelheid van ATCH afneemt, wat resulteert in een lagere gemeten ChE-activiteit (Komersová et al., 2007).
Hoewel bovengenoemde problemen zijn vermeld over de methode van Ellman, heeft elk van hen zijn eigen logische oplossing. Ten eerste, door eenvoudige adequate verdunning van het monster, worden de thiol- en oxidehoudende verbindingen in het monster ook verdund en dus wordt de mate van reactie van DTNB met deze stoffen aanzienlijk verminderd (Mohammadi et al., 2017). Ten tweede bedragen de molaire verzwakkingscoëfficiënten van indoxylacetaat en TNB respectievelijk 3900 M-1.cm-1 (Pohanka et al., 2011) en 13600 M-1.cm-1 (Ellman et al., 1961). De detectiegrens voor de meting van de ChE-activiteit door DTNB ligt dus ongeveer 3,5 keer lager dan die door indoxylacetaat. Ten derde is voor DTNB-concentraties van 0,2-0,598 mM de beste verhouding DTNB/ATCH-concentraties 1,25-3,74, wat resulteert in een optimale snelheid van ATCH-hydrolyse door ChE (Komersová et al., 2007).