Team:Cambridge/Protocols/Acetone Precipitation of Proteins

Terug naar Protocols

• 1 Aceton precipitatie van eiwitten
  • 1.1 Theorie
  • 1.2 Praktijk
  • 1.3 Veiligheid

Aceton precipitatie van eiwitten

Na de zuivering van eiwitten is het nodig om chemicaliën te verwijderen die zijn achtergebleven in de elutiebuffers en om het eiwitmonster te concentreren om verdere verwerking mogelijk te maken.

Theorie

Eiwitten zijn onoplosbaar in aceton (vooral bij lage temperaturen), terwijl veel kleine moleculen die met de verdere verwerking van eiwitten kunnen interfereren, wel oplosbaar zijn. Door het neerslaan van eiwitten in dit oplosmiddel kunt u verwijderen buffer verontreiniging en concentreer eiwit in een pellet die kan worden opgelost door andere oplosmiddelen.

Praktijk

1. Ca 30 min voordat u begint, koel een monster van aceton 4 keer het volume van de eiwitoplossing die u wilt neerslaan in een -20 vriezer.
2. Spilt eiwit monster in centrifugeerbuisjes voor de benchtop centrifuge.
3. Voeg koude aceton toe aan het eiwitmonster.
4. Vortex buizen om te mengen.
5. Incubeer gedurende 60 minuten bij -20.
6. Centrifugeer gedurende 10 minuten bij 13 000 xG
7. Decanteer supernatant – probeer de pellet niet te verstoren.
8. Laat de deksels van de buizen om resterende aceton te laten verdampen.
9. Opnieuw oplossen in de buffer die nodig is voor de downstream-processen.

Veiligheid