Luunmurtuman jälkeisen paranemisprosessin aikana pehmeä kallus muodostuu murtumakohdan viereen, korvautuu kovalla kalluksella, ja lopulta se muokkautuu uudelleen luun alkuperäiseen muotoon. Vaikka luukalvon kambiumkerroksella on raportoitu olevan olennainen rooli kalluksen muodostumisessa, tästä ei ole vielä suoraa in vivo -näyttöä. Pehmeän kalluksen solulinjan tutkimiseksi analysoimme murtuman paranemisprosessia Prx1-Cre;ROSA26-reportteri (R26R), Col1a1(3.6 kb)-Cre;R26R, Col1a1(2.3 kb)-Cre;R26R, Sox9-CreERT2;R26R ja Sox9-LacZ -hiirillä X-gal-värjäyksellä. Prx1-Cre;R26R-hiirissä, joissa luukalvon solut värjäytyivät X-gal-värjäyksellä ennen murtumaa, kaikki pehmytkalluksen solut olivat X-gal-positiivisia, kun taas Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R-hiirissä luukalvon solut värjäytyivät X-gal-värjäyksellä ennen murtumaa ja pehmytkallus koostui osittain X-gal-positiivisista soluista. Sitä vastoin Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R-hiirissä, joissa periosteumin kambiumkerroksessa olevat kypsät osteoblastit oli merkitty ennen murtumaa, murtumakohdan pehmeässä kalluksessa ei ollut X-gal-positiivisia soluja. Nämä tulokset viittaavat siihen, että suurin osa pehmeän kalluksen soluista on peräisin luukalvon mesenkymaalisista esiasteista eikä kypsistä osteoblastisoluista. Mielenkiintoista on, että Sox9-LacZ-hiirillä Sox9:ää ilmentäviä X-gal-positiivisia soluja ilmaantui murtumakohdan vieressä olevaan luukalvoon 3 päivän kuluttua murtumasta. Osoitimme tämän injektoimalla tamoksifeeniä Sox9-CreERT2;R26R-hiiriin 3 päivän ajan murtuman jälkeen, jolloin nämä Sox9-ekspressoivat luukalvon solut synnyttivät soluja pehmeässä ja kovassa kallossa. Tuloksemme osoittavat, että luukalvon solut, joissa Sox9-ekspressio indusoituu heti murtuman jälkeen, ovat murtumakalluksen kondrosyyttien ja osteoblastien tärkein lähde.