Podczas procesu gojenia po złamaniu kości, miękki kalus tworzy się w sąsiedztwie miejsca złamania, jest zastępowany przez twardy kalus i jest ostatecznie przebudowywany do oryginalnej konfiguracji kości. Chociaż warstwa kambium okostnej odgrywa istotną rolę w tworzeniu kalusa, nadal brakuje bezpośrednich dowodów in vivo na to. Aby zbadać linię komórkową miękkiego kalusa, przeanalizowaliśmy proces gojenia się złamań u myszy Prx1-Cre;ROSA26 reporter (R26R), Col1a1(3.6 kb)-Cre;R26R, Col1a1(2.3 kb)-Cre;R26R, Sox9-CreERT2;R26R, i Sox9-LacZ z barwieniem X-gal. U myszy Prx1-Cre;R26R, u których komórki okostnej przed złamaniem zabarwiły się na X-gal, wszystkie komórki w miękkim kalusie były X-gal dodatnie, podczas gdy u myszy Col1a1(3.6 kb)-Cre;R26R, komórki okostnej przed złamaniem zabarwiły się na X-gal, a miękki kalus był częściowo złożony z komórek X-gal dodatnich. W przeciwieństwie do myszy Col1a1(2.3 kb)-Cre;R26R, u których dojrzałe osteoblasty w warstwie kambium okostnej były znakowane przed złamaniem, żadne komórki w miękkim kalusie w miejscu złamania nie były X-gal dodatnie. Wyniki te sugerują, że większość komórek w miękkim kalusie pochodzi z mezenchymalnych progenitorów w okostnej, a nie z dojrzałych komórek osteoblastycznych. Co ciekawe, u myszy Sox9-LacZ, komórki X-gal-dodatnie wykazujące ekspresję Sox9 pojawiły się w okostnej przylegającej do miejsca złamania 3 dni po złamaniu. Wykazaliśmy to przez wstrzyknięcie tamoksyfenu myszom Sox9-CreERT2;R26R przez 3 dni po złamaniu, tak że te komórki okostnej wykazujące ekspresję Sox9 dały początek komórkom w miękkich i twardych kalli. Nasze odkrycia pokazują, że komórki okostnej, w których ekspresja Sox9 jest indukowana tuż po złamaniu, są głównym źródłem chondrocytów i osteoblastów w kalusie złamania.