Blueberry Supplementation Improves Memory in Older Adults | CDhistory

Procedura

Prospektywni uczestnicy zostali ocenieni za pomocą ustrukturyzowanych instrumentów wywiadu w celu określenia kwalifikowalności do włączenia do badania. Academic and Medical History Questionnaire (20) został wykorzystany do uzyskania informacji demograficznych oraz informacji dotyczących osiągnięć akademickich, aktualnych i przeszłych schorzeń medycznych oraz przyjmowania leków i zażywania substancji. Wykluczono osoby z cukrzycą, zaburzeniami związanymi z nadużywaniem substancji lub zdiagnozowanym schorzeniem psychiatrycznym lub neurologicznym, a także osoby stosujące leki, które mogą wpływać na pomiar wyników, takie jak benzodiazepiny. Poziom upośledzenia pamięci określono za pomocą kwestionariusza Clinical Dementia Rating (CDR), który pozwala uzyskać od uczestnika i informatora (zazwyczaj współmałżonka lub dorosłego dziecka) informacje dotyczące charakteru i zakresu zaburzeń poznawczych przejawiających się w codziennych czynnościach wykonywanych w domu i w społeczności (21). Oceniane są domeny: pamięć, orientacja, rozwiązywanie problemów, sprawy społeczne, czynności domowe i opieka osobista, a oceny dla każdej domeny składają się na globalną klasyfikację CDR, w której domena pamięci ma największą wagę. Klasyfikacje CDR obejmują brak upośledzenia, łagodne pogorszenie oraz łagodne, umiarkowane i ciężkie otępienie. Do badania włączono osoby z łagodnym pogorszeniem odpowiadającym łagodnym zaburzeniom poznawczym i wykluczono osoby z klasyfikacją CDR wskazującą na brak pogorszenia oraz osoby z łagodnym, umiarkowanym i ciężkim otępieniem. Oprócz globalnej klasyfikacji CDR, uzyskano również wynik sumy pól. Wynik ten reprezentował arytmetyczną sumę ocen kategorii w sześciu domenach funkcjonowania i służył jako środek do ilościowego określenia ogólnego poziomu funkcjonalnego spadku (22).

Sok z dzikich jagód został komercyjnie przygotowany z dojrzałych, zamrożonych dzikich (lowbush) jagód (Vaccinium angustifolium Aiton) przez Van Dyk’s Health Juice Products Ltd (Caledonia, Nowa Szkocja, Kanada) i został dostarczony do tego badania przez Wild Blueberry Association of North America, Old Town, ME, USA. Jagody były rozmrażane, wyciskane, filtrowane, pasteryzowane, a następnie rozlewane do litrowych butelek z bursztynowego szkła. Z jednego kilograma owoców borówki uzyskano około 735 mL soku o pojedynczej mocy.

Analizy przeprowadzono na próbkach soku użytego w tym badaniu. Najbardziej obfitymi składnikami rozpuszczonymi w soku z dzikich borówek były glukoza, fruktoza oraz kwas jabłkowy i cytrynowy (23). Kolorymetryczny pomiar całkowitej zawartości fenoli w soku wykazał stężenie 2,38 g równoważników kwasu galusowego/L (24). Głównymi fenolami w soku były ester kwasu hydroksycynamonowego, kwas chlorogenowy o stężeniu około 734 mg/L i flawonoid antocyjany o stężeniu 877 mg równoważnika 3-glukozydu cyjanidyny/L soku na podstawie analizy HPLC, jak opisano w innym miejscu (25). Straty antocyjanów i innych związków fenolowych w soku jagodowym mogą wystąpić podczas przechowywania. Podczas około trzymiesięcznego przechowywania próbek soku, straty w całkowitej zawartości fenoli i antocyjanów zostały określone na 23% i 20%, odpowiednio, dla soku, który był przechowywany w warunkach chłodniczych w butelkach bursztynowych.

Dzienną konsumpcję utrzymywano pomiędzy 6 mL/kg a 9 mL/kg stosując schemat dawkowania ustalony na podstawie masy ciała. Osobom o wadze od 54 do 64 kg przepisywano 444 mL/dobę, osoby o wadze od 65 do 76 kg spożywały 532 mL/dobę, a osoby o wadze od 77 do 91 kg spożywały 621 mL/dobę. Tabela 1 zawiera dane dotyczące spożycia fenoli i antocyjanów określone na podstawie próbek soku z borówki amerykańskiej użytego w tym badaniu. Ten zakres dawek odpowiadał objętości stosowanej w badaniach na ludziach z sokiem z winogron Concord (19,26). Uczestnicy badania byli ślepi na otrzymywany suplement i zostali poinformowani, że badanym produktem może być sok z winogron, sok z borówek lub jagodowy napój placebo. Przed dystrybucją sok przechowywano w chłodnym pomieszczeniu w temperaturze 4°C. Badanych poinstruowano, by przechowywali sok w lodówce w domu i przyjmowali zalecane dzienne ilości w równych, podzielonych dawkach podczas porannych, południowych i wieczornych posiłków. Zapewniliśmy pojemniki z zaznaczonymi indywidualnymi dawkami dla każdego uczestnika, aby zminimalizować ryzyko błędnego odmierzania. Czas trwania interwencji wynosił 12 tygodni. Pomimo faktu, że stanowiło to znacznie mniejszy procent całkowitej długości życia dla ludzi niż dla gryzoni, spodziewaliśmy się, że odpowiedź biologiczna wystąpi w zasadniczo tych samych ramach czasowych ze względu na zgodność między wcześniejszymi badaniami na ludziach i zwierzętach. Suplementacja borówką w podobnych ramach czasowych w doświadczeniach z udziałem starszych zwierząt wykazała poprawę zdolności poznawczych (12,14). Ponadto badania na ludziach, w których stosowano sok z jagód, wykazały korzystne zmiany w markerach zapalnych i zdolności antyoksydacyjnej (26).

Badani otrzymywali sok butelkowany podczas wizyty wyjściowej oraz podczas wizyty okresowej w 6 tygodniu interwencji. Przestrzeganie protokołu konsumpcji i efekty uboczne oceniano podczas cotygodniowych kontaktów telefonicznych oraz w bezpośrednim wywiadzie podczas wizyt pośrednich i końcowych. Uczestników badania poinstruowano, aby unikali owoców jagodowych, soków i ekstraktów jagodowych przez cały czas trwania badania oraz dostarczono im listę pokarmów i suplementów, których należy unikać. Lista ta zawierała między innymi owoce i napoje takie jak jagody, jeżyny, wiśnie, winogrona, sok winogronowy, granaty, truskawki i wino.

Oceny przeprowadzono na poziomie podstawowym przed leczeniem i w ostatnim tygodniu interwencji. Pierwszorzędowymi wynikami były miary funkcji pamięci, w tym Test Słownego Skojarzonego Uczenia Się (V-PAL; 27) i Kalifornijski Test Słownego Uczenia Się (CVLT; 28). Zadania oparte na kojarzeniu parami pozwoliły zidentyfikować osoby z postępującą neurodegeneracją i wykazały wrażliwość na wczesną i bardziej zaawansowaną chorobę Alzheimera (29), a test V-PAL okazał się wrażliwy na zmiany rozwojowe w zakresie wydajności między młodymi, w średnim wieku i starszymi kobietami (30). Zadanie to wymaga od osoby badanej nauczenia się nowych skojarzeń między popularnymi jedno- i dwusylabowymi słowami niepowiązanymi semantycznie (np. help-years). Wynik V-PAL reprezentuje skumulowaną liczbę poprawnych odpowiedzi zsumowanych w czterech próbach uczenia się i testowania. CVLT jest szeroko stosowanym zadaniem uczenia się i przypominania listy, które wykazało wrażliwość na zmiany pamięci związane z wiekiem, MCI i demencją (31). Obejmuje ono 16-pozycyjną listę typowych słów, które można pogrupować w kategorie semantyczne. Nie ma jednak wymogu kodowania nowych skojarzeń. Do oceny retencji listy słów użyto wyniku swobodnego przypominania. Oba testy pamięci werbalnej zostały włączone do badania, ponieważ stawiają nieco inne wymagania poznawcze. Podczas gdy V-PAL wymaga tworzenia nowych skojarzeń, CVLT obejmuje nabywanie i utrzymywanie listy pojedynczych słów. Oba polegają na przetwarzaniu hipokampowym, chociaż zadanie sparowanych skojarzeń może być bardziej zasobochłonne i potencjalnie bardziej wrażliwe na efekty starzenia się poznawczego (32).

Alternatywne formy każdego zadania pamięciowego były używane na wizycie podstawowej i końcowej, tak że specyficzna zawartość pozycji testowych nie była powtarzana. Użycie alternatywnych form znacząco łagodzi efekty praktyki związane z projektami test-retest, w szczególności w odniesieniu do testów pamięciowych (33). Jednak alternatywne formy mogą nie wyeliminować przyrostu wydajności przy ponownym teście związanego z efektami praktyki proceduralnej; to znaczy znajomości procedury testowej (34).

Nastrój oceniano za pomocą Geriatrycznej Skali Depresji (GDS; 35), 30-itemowego inwentarza zaprojektowanego do oceny objawów depresji u starszych dorosłych. Zmierzyliśmy również wagę i obwód talii oraz uzyskaliśmy próbki krwi na czczo do oznaczenia wartości glukozy i insuliny w surowicy przez laboratorium biochemiczne Generalnego Centrum Badań Klinicznych (GCRC) na Uniwersytecie Cincinnati.

Pierwotne analizy statystyczne obejmowały zależne testy t-testów próby w celu określenia zmiany od linii podstawowej do końcowej wizyty w wydajności pamięci, nastroju, antropometrii ciała i parametrów metabolicznych. Ustawiliśmy prawdopodobieństwo α błędu typu 1 na 0,05, aby zgłosić statystycznie istotne efekty. Biorąc pod uwagę wstępną naturę tego badania, zgłosiliśmy trendy przy α ≤ 0,10. Obliczyliśmy również statystyki Cohen’s d effect size (36) dla tych analiz, które zostały scharakteryzowane jako małe (0,2), średnie (0,5) i duże (0,8).

Ponieważ obawy dotyczące przyrostu wydajności przy powtarzanych testach pamięci, wykonaliśmy również analizy kowariancji (ANCOVA), aby kontrolować potencjalne efekty praktyki proceduralnej, porównując wydajność pamięciową próbki jagód z próbką placebo z winogron z badania towarzyszącego. Analizy te wyodrębniły efekt interwencji, używając wyników z wizyty końcowej jako miary zależnej i odpowiedniego wyniku z wizyty wyjściowej jako miary kowariantnej (37). Cohen’s f (36) reprezentuje statystykę wielkości efektu dla tych analiz, które są małe (0,1), średnie (0,25) i duże (0,40).