Drogi Redaktorze,
Ostatnio argumentowano, że metoda Ellmana nie ma wystarczającej dokładności do pomiaru aktywności cholinesteraz (ChEs) (Komersová i in., 2007; Sinko i in., 2007; Pohanka i in., 2011; Dingova i in., 2014). Metoda ta została po raz pierwszy wprowadzona i opisana przez Ellmana i jego współpracowników i opiera się na hydrolizie pochodnej tiocholiny (acetylo- lub butyrylowej) przez ChEs (prawdziwe lub pseudo) i reakcji powstałej tiocholiny z odczynnikiem tiolowym kwasem 5,5′-ditiobis-2-nitrobenzoesowym (DTNB) i utworzeniu anionu kwasu 5-tio-2-nitrobenzoesowego (TNB). Pomiar absorpcji jonu TNB przy długości fali 410 nm dla pseudo-ChE i 440 nm dla retikulocytarnej acetylo-ChE pośrednio określa aktywność ChE (Ellman i in., 1961). Niektórzy autorzy uważają, że lepszym substratem niż acetylocholina (ATCH) jest octan indoksylu, ponieważ nie reaguje on z oksymami i tiolem stosowanymi w metodzie Ellmana (Pohanka i in., 2011). Ponadto DTNB, który jest niestabilny, wchodzi w interakcje z wolnymi grupami sulfhydrylowymi w próbce i może wpływać na aktywność cholinesteraz (Dingova i in., 2014). Inni badacze wykazali, że oksymy reagują z ATCH (oksymoliza), wytwarzając tiocholinę i w konsekwencji jon TNB (Sinko i in., 2007). Niektórzy autorzy wspominają również, że gdy stężenie DTNB jest znacznie wyższe niż stężenie ATCH, szybkość hydrolizy ATCH ulega zmniejszeniu, co skutkuje niższą zmierzoną aktywnością ChE (Komersová i in., 2007).
Pomimo, że powyższe problemy zostały przedstawione w odniesieniu do metody Ellmana, każdy z nich ma swoje logiczne rozwiązanie. Po pierwsze, poprzez proste odpowiednie rozcieńczenie próbki, związki zawierające tiole i oksymy w próbce są również rozcieńczone, a zatem zakres reakcji DTNB z tymi substancjami jest znacznie zmniejszony (Mohammadi i in., 2017). Po drugie, molowe współczynniki atenuacji indoksylacetatu i TNB wynoszą odpowiednio 3900 M-1.cm-1 (Pohanka i in., 2011) i 13600 M-1.cm-1 (Ellman i in., 1961). Zatem granica wykrywalności pomiaru aktywności ChE przez DTNB jest około 3,5 razy niższa niż przez indoksylooctan. Po trzecie, dla stężeń DTNB wynoszących 0,2-0,598 mM, najlepszy stosunek stężeń DTNB/ATCH wynosi 1,25-3,74, co skutkuje optymalną szybkością hydrolizy ATCH przez ChE (Komersová et al., 2007).
.