Team:Cambridge/Protocols/Acetone Precipitation of Proteins

Back to Protocols

• 1 Acetone precipitation of proteins
  • 1.1 Theory
  • 1.2 Praktyka
  • 1.3 Bezpieczeństwo

Wytrącanie białek acetonem

Po oczyszczaniu białek konieczne jest usunięcie związków chemicznych zatrzymanych w buforach elucyjnych i zagęszczenie próbki białka w celu umożliwienia dalszego przetwarzania.

Teoria

Białka są nierozpuszczalne w acetonie (szczególnie w niskich temperaturach), podczas gdy wiele małych cząsteczek, które mogłyby zakłócać dalszą pracę z białkami, jest rozpuszczalnych. Wytrącając białka w tym rozpuszczalniku można usunąć zanieczyszczenia buforowe i skoncentrować białko w postaci granulatu, który może być ponownie rozpuszczony w innych rozpuszczalnikach.

Praktyka

1. Około 30 min przed rozpoczęciem schłodzić próbkę acetonu o objętości 4 razy większej niż objętość roztworu białka, który ma być wytrącony, w zamrażarce o temperaturze -20.
2. Rozlać próbkę białka do probówek wirówki stołowej.
3. Dodać zimny aceton do próbki białka.
4. Wymieszać probówki przez worteksowanie.
5. Inkubować przez 60 minut w temperaturze -20.
6. Wirować przez 10 minut przy 13 000 xG
7. Zdekantować supernatant – starać się nie naruszyć osadu.
8. Zdjąć wieczka z probówek, aby umożliwić odparowanie pozostałego acetonu.
9. Rozpuścić ponownie w dowolnym buforze wymaganym przez dalsze procesy.

Bezpieczeństwo