Equipe:Cambridge/Protocols/Acetone Precipitation of Proteins

Back to Protocol

• 1 Precipitação de proteínas por acetona
  • 1.1 Teoria
  • 1.2 Prática
  • 1.3 Segurança

Precipitação de proteína por acetona

Após a purificação da proteína é necessário remover os produtos químicos retidos nos tampões de eluição e concentrar a amostra de proteína para permitir o processamento a jusante.

Teoria

As proteínas são insolúveis em acetona (particularmente a baixas temperaturas) enquanto muitas moléculas pequenas que poderiam interferir com o trabalho das proteínas a jusante são solúveis. Ao precipitar as proteínas neste solvente você pode remover o contaminante tampão e concentrar a proteína em um sedimento que pode ser redissolvido por outros solventes.

Prática

1. Aproximadamente 30 minutos antes de começar, resfriar uma amostra de acetona 4 vezes o volume da solução protéica que você deseja precipitar em um freezer -20.
2. Amostra de proteína derramada em tubos de centrífuga para a centrífuga de bancada.
3. Adicione acetona fria à amostra de proteína.
4. Tubos de vórtice para misturar.
5. Incube durante 60 minutos a -20.
6. Centrifugação durante 10 minutos a 13 000 xG
7. Decantar sobrenadante – tente não perturbar o sedimento.
8. Deixe as tampas fora dos tubos para deixar a acetona restante evaporar.
9. Redissolva em qualquer tampão que os processos a jusante necessitem.

Segurança