Blueberry Supplementation Improves Memory in Older Adults | CDhistory

Procedimento

Prospective participants were assessed with structured interview instruments to determine eligibility for study inclusion. O Questionário de História Acadêmica e Médica (20) foi utilizado para obter informações demográficas e informações sobre o desempenho acadêmico, condições médicas atuais e passadas, e uso de medicamentos e substâncias. Foram excluídos aqueles com diabetes, distúrbio de abuso de substâncias ou condição psiquiátrica ou neurológica diagnosticada, bem como aqueles que usam medicamentos que possam afetar as medidas de resultados, como benzodiazepinas. O nível de comprometimento da memória foi determinado com o Clinical Dementia Rating (CDR), que elucida informações do participante e de um informante (tipicamente, cônjuge ou filho adulto) sobre a natureza e extensão do declínio cognitivo como manifestado nas atividades cotidianas em casa e na comunidade (21). Foram avaliados os domínios memória, orientação, resolução de problemas, assuntos comunitários, atividades domésticas e cuidados pessoais, e as classificações para cada domínio contribuíram para uma classificação global do CDR com o domínio de memória mais ponderado. As classificações do CDR incluem sem comprometimento, leve declínio e demência leve, moderada e grave. Inscrevemos indivíduos com declínio leve correspondente à Mild Cognitive Impairment e excluímos aqueles com classificação de CDR indicando sem comprometimento e aqueles com demência leve, moderada e grave. Além da classificação global do CDR, também foi derivada a soma da pontuação das caixas. Essa pontuação representou a soma aritmética das classificações da categoria nos seis domínios de funcionamento e serviu como um meio de quantificar o nível geral de declínio funcional (22).

Sumo de mirtilo silvestre foi preparado comercialmente a partir de mirtilos silvestres maduros e congelados (lowbush) (Vaccinium angustifolium Aiton) pela Van Dyk’s Health Juice Products Ltd (Caledonia, Nova Escócia, Canadá) e foi fornecido para essa pesquisa pela Wild Blueberry Association of North America, Old Town, ME, EUA. As bagas foram descongeladas, prensadas, filtradas, pasteurizadas, e depois engarrafadas em garrafas de vidro âmbar de um litro. Um kg de mirtilo produziu aproximadamente 735 mL de suco de força única.

Análises foram realizadas em amostras do suco utilizado neste estudo. Os componentes dissolvidos mais abundantes no suco de mirtilo silvestre foram glicose, frutose e ácido málico e cítrico (23). A medição colorimétrica dos fenóis totais do suco indicou uma concentração de 2,38 g de equivalentes de ácido gálico/L (24). Os principais fenólicos no suco foram o éster do ácido hidroxicinâmico, ácido clorogênico a aproximadamente 734 mg/L, e antocianinas flavonóides a 877 mg de equivalentes de cianidina 3-glucósido/L suco com base na análise por HPLC, como descrito em outra parte (25). Perdas em antocianinas e outros fenólicos no suco de mirtilo podem ocorrer durante a armazenagem. Durante os aproximadamente três meses de armazenamento das amostras de suco, as perdas no total de fenóis e antocianinas foram determinadas como sendo de 23% e 20%, respectivamente, para suco que foi armazenado sob refrigeração em garrafas âmbar.

O consumo diário foi mantido entre 6 mL/kg e 9 mL/kg por meio de um programa de dosagem determinado pelo peso corporal. Indivíduos com 54 a 64 kg foram prescritos 444 mL/dia, aqueles com peso entre 65 e 76 kg consumiram 532 mL/dia, e aqueles com peso entre 77 e 91 kg consumiram 621 mL/dia. A tabela 1 contém dados sobre a ingestão de fenólico e antociânico, determinados a partir de amostras do suco de mirtilo utilizadas neste estudo. Essa faixa de dosagem correspondeu ao volume utilizado em ensaios em humanos com suco de uva Concord (19,26). Os participantes do estudo estavam cegos para o suplemento que receberam e foram informados de que o produto do estudo poderia ser suco de uva, suco de mirtilo ou uma bebida placebo de bagas. O suco foi armazenado em uma câmara fria a 4 °C antes da distribuição. Os sujeitos foram instruídos a refrigerarem o suco em casa e a tomarem as quantidades diárias prescritas em doses iguais e divididas com as refeições da manhã, meio-dia e noite. Fornecemos recipientes com dosagens individuais marcadas para cada sujeito para minimizar o risco de erros de medição. O período de intervenção foi de 12 semanas. Apesar de isto representar uma percentagem muito menor da duração total da vida humana do que a dos roedores, esperávamos que a resposta biológica ocorresse substancialmente no mesmo período de tempo, tendo em conta a correspondência entre estudos humanos e animais anteriores. A suplementação de mirtilo para prazos semelhantes em experiências com animais idosos demonstrou melhorias no desempenho cognitivo (12,14). Além disso, experimentos em humanos com essa duração com suco de mirtilo mostraram mudanças benéficas em marcadores inflamatórios e capacidade antioxidante (26).

Os sujeitos receberam suco engarrafado na visita de linha de base e em uma visita provisória durante a semana 6 da intervenção. A adesão ao protocolo de consumo e os efeitos colaterais foram avaliados com contatos telefônicos semanais e por entrevista direta durante as visitas interinas e finais. Os sujeitos foram instruídos a evitar frutos silvestres e sucos e extratos de frutos silvestres durante o período do estudo e foi fornecida uma lista de alimentos e suplementos a serem evitados. Esta lista incluiu frutas e bebidas como mirtilos, amoras, cerejas, uvas, suco de uva, romãs, morangos e vinho, entre outros.

As avaliações foram realizadas na linha de base do pré-tratamento e durante a semana final da intervenção. Os resultados primários foram medidas da função da memória, incluindo o Teste de Aprendizagem Verbal Paired Associate (V-PAL; 27) e o Teste de Aprendizagem Verbal da Califórnia (CVLT; 28). Tarefas de Associado Parado identificaram aquelas com neurodegeneração progressiva e demonstraram sensibilidade ao Alzheimer precoce e mais avançado (29), e o V-PAL demonstrou ser sensível a mudanças de desempenho de desenvolvimento entre mulheres jovens, de meia-idade e idosas (30). Esta tarefa exige que o sujeito aprenda novas associações entre palavras comuns de uma e duas sílabas semanticamente não relacionadas (por exemplo, help-years). A pontuação de desempenho V-PAL representa o número cumulativo de respostas corretas somadas em quatro testes de aprendizagem e teste. O CVLT é uma tarefa de aprendizagem e memorização amplamente utilizada que demonstrou sensibilidade às mudanças de memória relacionadas à idade, ICM e demência (31). Envolve uma lista de 16 itens de palavras comuns que podem ser agrupadas em categorias semânticas. Entretanto, não há demanda para codificar novas associações. O escore de memória livre foi usado para avaliar a retenção da lista de palavras. Ambos os testes de memória verbal foram incluídos porque induzem demandas cognitivas um pouco diferentes. Enquanto o V-PAL requer a formação de novas associações, o CVLT envolve a aquisição e retenção de uma lista de palavras individuais. Ambos dependem do processamento hipocampal, embora a tarefa associada pareada possa ser mais intensiva em recursos e potencialmente mais sensível aos efeitos do envelhecimento cognitivo (32).

Formas alternativas de cada tarefa de memória foram utilizadas na linha de base e nas visitas finais para que o conteúdo específico do item do teste não fosse repetido. O uso de formas alternativas atenua substancialmente os efeitos práticos associados aos desenhos de teste-reteste, em particular no que diz respeito aos testes de memória (33). Entretanto, formas alternativas podem não eliminar o ganho de desempenho no re-teste relacionado aos efeitos da prática processual; ou seja, a familiaridade com o procedimento do teste (34).

Mood foi avaliado com a Escala de Depressão Geriátrica (GDS; 35), um inventário de 30 itens projetado para avaliar os sintomas de depressão em adultos mais velhos. Também medimos peso e circunferência da cintura, e obtivemos amostras de sangue em jejum para determinação dos valores séricos de glicose e insulina pelo laboratório de bioquímica do General Clinical Research Center (GCRC) da Universidade de Cincinnati.

As análises estatísticas primárias incluíram testes t de amostras dependentes para determinar a mudança da linha de base para a visita final no desempenho da memória, humor, antropometria corporal e parâmetros metabólicos. Nós definimos α probabilidade de erro tipo 1 em 0,05 para relatar efeitos estatisticamente significativos. Dada a natureza preliminar deste estudo, relatamos tendências em α ≤ 0.10. Também calculamos a estatística do tamanho do efeito de Cohen (36) para essas análises, que são caracterizadas como pequenas (0,2), médias (0,5) e grandes (0,8).

Por causa da preocupação com o ganho de desempenho com testes de memória repetidos, também realizamos análises de covariância (ANCOVA) para controlar os potenciais efeitos da prática processual, comparando o desempenho da memória da amostra de mirtilo com o da amostra de placebo de uva do estudo companheiro. Estas análises isolaram o efeito da intervenção utilizando como medida dependente os resultados da visita final e como medida covariada a pontuação correspondente da visita de base (37). O f de Cohen (36) representa a estatística do tamanho do efeito para estas análises, que são pequenas (0,1), médias (0,25), e grandes (0,40).