Dear Editor,
Foi argumentado recentemente que o método de Ellman não tem precisão suficiente para a medição de atividades de colinesterases (ChEs) (Komersová et al., 2007; Sinko et al., 2007; Pohanka et al., 2011; Dingova et al., 2014). Este método foi introduzido e descrito pela primeira vez por Ellman e seus colegas e é baseado na hidrólise de tiocholina-derivado (acetil ou butiril) por EC (verdadeiro ou pseudo) e reação da tiocholina resultante com o reagente thiol 5,5′-dithiobis-2-nitrobenzoico (DTNB) e formação do anion 5-tio-2-nitrobenzoico (TNB). A medição da absorção de íons TNB a 410 nm para pseudo-ChE e 440 nm para acetil-ChE reticulocítico determina indiretamente a atividade de ChE (Ellman et al., 1961). Alguns autores propuseram que o acetiltiocholina (ATCH) é melhor substrato que o acetiltiocholina, pois não reage com antídotos oxime e tiol utilizados para o método de Ellman (Pohanka et al., 2011). Além disso, o DTNB, que é instável, interage com grupos sulfidrílicos livres na amostra e pode afetar a atividade da colinesterase (Dingova et al., 2014). Outros pesquisadores mostraram que os oximos reagem com a ATCH (oximólise), produzindo tiocholina e consequentemente íon TNB (Sinko et al., 2007). Alguns autores também mencionaram que quando a concentração de DTNB é muito maior que a concentração de ATCH, a taxa de hidrólise de ATCH é diminuída resultando em uma menor atividade medida de EQ (Komersová et al., 2007).
Embora os problemas acima mencionados tenham sido mencionados sobre o método de Ellman, cada um deles tem a sua própria solução lógica. Primeiro, pela simples diluição apropriada da amostra, os compostos contendo tiol e oximos na amostra também são diluídos e, portanto, a extensão da reação do DTNB com estas substâncias é consideravelmente reduzida (Mohammadi et al., 2017). Em segundo lugar, os coeficientes de atenuação molar de indoxilacetate e TNB são 3900 M-1.cm-1 (Pohanka et al., 2011) e 13600 M-1.cm-1 (Ellman et al., 1961), respectivamente. Assim, o limite de detecção para medição da atividade de EQ pelo DTNB é cerca de 3,5 vezes menor que o do indoxilacetato. Em terceiro lugar, para concentrações de DTNB de 0,2-0,598 mM, a melhor razão de concentrações de DTNB/ATCH é de 1,25-3,74 o que resulta em taxa ótima de hidrólise de ATCH por ChE (Komersová et al., 2007).