Acanthopanacis Senticosi Radix et Rhizoma seu Caulis, vulgarmente conhecido como ginseng siberiano ou Ciwujia em chinês, é a raiz seca e rizoma ou caule de Acanthopanax senticosus (anteriormente classificado como Eleutherococcus senticosus). Segundo a Farmacopéia Chinesa, é uma medicina tradicional chinesa amplamente prescrita para nutrir o qi, fortificar o baço, tonificar o rim e tranquilizar a mente. É também um alimento funcional conhecido por suas atividades anti-fadiga, neuroprotetor e imunomodulador. Nesta revisão, será discutida a ação imunomoduladora e os componentes ativos correspondentes da Ciwujia. Além disso, tentou-se comparar a potência do extrato aquoso com a do extrato de etanol na regulação da produção de citocinas a partir de células mononucleares do sangue periférico humano, de modo a fornecer mais informações sobre como o Ciwujia deve ser preparado para se beneficiar de suas propriedades imunomoduladoras.
O efeito imunomodulador do Ciwujia foi clinicamente comprovado na década de 1980. Um estudo duplo-cego controlado por placebo realizado por Bohn e colegas demonstrou que a preparação do etanol Ciwujia causou um aumento drástico no número absoluto de células imunocompetentes, com um efeito especialmente pronunciado nos linfócitos T, predominantemente do tipo ajudante/indutor, e também nas células citotóxicas e naturais assassinas de voluntários saudáveis . Posteriormente, vários trabalhos de pesquisa científica foram conduzidos para elucidar sua ação em mais detalhes.
Extrato aquoso e extrato de etanol
Bambos extrato aquoso e extrato de etanol de Ciwujia foram relatados por seus efeitos imunológicos.
A administração oral de extratos aquosos de amostras de Ciwujia de cinco fontes diferentes a 1 g/kg de peso corporal por 9 dias consecutivos poderia prolongar significativamente o tempo de natação de ratos C57 BL/6J machos. Alguns dos extratos aquosos inibiram a redução da atividade natural killer (NK) em camundongos estressados pela natação forçada. O resultado do efeito estimulante da NK estava de acordo com o relatado pela equipe da Yoon . A administração intravenosa de GF100 (uma infusão aquosa de Ciwujia) aumentou significativamente a citotoxicidade NK de camundongos BALB/c em direção às células do linfoma Yac-1 de células T murinas. Por outro lado, o GF100 inibiu significativamente a metástase pulmonar das células 26-M3.1 do cólon de forma dose-dependente e este efeito foi completamente abolido se as células NK fossem esgotadas por injeção de soro anti-asialo GM1 de coelho. Além das células NK, esplenócitos e macrófagos foram também os alvos imunológicos do GF100. O tratamento com GF100 aumentou a proliferação de concanavalina A (Con A)-esplenócitos estimulados pela dosagem de esplenócitos, dependendo da dose. Além disso, o tratamento de macrófagos peritoneais com GF100 em experimento in vitro induziu a produção de várias citocinas como IL-1β, TNF-α, IL-12 e IFN-γ de forma dose-dependente. Além disso, macrófagos peritoneais obtidos de ratos tratados com GF100 mostraram uma maior actividade citolítica contra as células tumorais do que os dos ratos não tratados. Portanto, concluiu-se que o efeito antitumoral do GF100 estava associado à ativação de macrófagos e células NK . Wang e colegas também relataram que uma preparação aquosa de Ciwujia poderia aumentar significativamente a função fagocitária dos monócitos em camundongos .
Etanol extraído de Ciwujia também exercia atividade imunomoduladora. Um preparado farmacêutico de etanol de Ciwujia influenciou marcadamente as sínteses de quimiocinas e citocinas de culturas de sangue total ativadas de voluntários saudáveis. Aumentou a liberação de Rantes, mas diminuiu a produção de IL-4, IL-5 e IL-12. Dependendo da concentração utilizada, seu efeito sobre o G-CSF, IL-6 e IL-13 pode ser estimulante ou inibitório. Outro 40% de extrato aquoso de etanol (AE) tem sido relatado para poder neutralizar o efeito tóxico do cádmio que induziu mudanças nos mecanismos imunorreguladores de um hospedeiro. A administração oral de AE por 8 semanas levou a uma diminuição significativa dos níveis de cádmio e aumentou a quantidade de macrófagos e linfócitos B e T em baços de ratos intoxicados com cloreto de cádmio .
Polissacarídeos e glicoproteínas
Polissacarídeos e glicoproteínas são duas frações imunomoduladoras ativas da Ciwujia.
Polissacarídeos de Ciwujia (PES), quando injetados intraperitonealmente a 100 mg/kg por 4-6 dias consecutivos, poderiam aumentar significativamente a contagem de células formadoras de placas de anticorpos IgM em camundongos desafiados com hemácias de ovelhas, e também aumentar significativamente os anticorpos anti-BSA e aumentar grandemente a fagocitose de macrófagos peritoneais . Além disso, o próprio PSA mostrou forte atividade mitogênica em células do baço de camundongos de maneira dose-dependente e poderia aumentar a atividade estimulante do lipopolissacarídeo (LPS) nas transformações linfocitárias .
Mais recentemente, a equipe de Han investigou o mecanismo da ação imunomoduladora de uma fração polissacarídeo isolada de uma cultura celular de A. senticosus (ASP) usando ensaios in vitro . Eles descobriram que a ASP aumentou a proliferação de células B e aumentou a produção de anticorpos IgM policlonais de células B, dependendo da dose. Além disso, a ASP estimulou macrófagos murinos peritoneais, como refletido pelo aumento das expressões de mRNA e proteínas de citocinas como IL-1β, IL-6 e TNF-α. Além disso, a ASP aumentou a expressão do gene do óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e a produção de NO. Com base na descoberta de que as atividades da ASP nas células B e macrófagos foram significativamente reduzidas pelo tratamento das células com anticorpos para receptor Toll-like (TLR)-4 e TLR-2 antes da ASP, concluiu-se que a ASP ativa as células B e macrófagos através do caminho de sinalização TLR. Entretanto, foi demonstrado que a ASP não ativa células T .
Acanthopanax senticosus polissaccharides funciona não apenas em sistemas in vitro ou em roedores normais, mas também em animais imunocomprometidos/imunologicamente desafiados. Uma fração ácida de polissacarídeos foi relatada para aumentar os índices de timo e baço, aumentar a contagem de leucócitos no sangue periférico, aumentar a função fagocitária dos macrófagos, aumentar os níveis de TNF-α, IFN-γ e hemolisina sérica, aumentar a proliferação de esplenócitos e diminuir a taxa de apoptose de linfócitos esplênicos em camundongos imunossuprimidos induzidos por ciclofosfamida. Na China, A. senticosus é comumente usado como um suplemento dietético por veterinários para promover a saúde animal. Pode melhorar a resposta imunológica celular e humoral de leitões desmamados, regulando a produção de linfócitos, citocinas e anticorpos . Por outro lado, o polissacarídeo dietético A. senticosus (ASPS) modulou a liberação de citocinas pró-inflamatórias durante o desafio imunológico. Ele diminuiu a elevação dos níveis plasmáticos e as expressões de mRNA do baço de IL-1β, IL-6 e TNF-α induzidas pelo desafio LPS em leitões .
GF-AS foi uma camada de proteína solúvel fracionada de casca de caule de A. senticosus. Ela induziu a produção de citocinas de macrófagos peritoneais e exerceu efeito profilático contra metástases pulmonares induzidas por células tumorais do cólon26-M3.1 através da ativação de células NK em camundongos. Usando a cromatografia em gel e o ensaio de proliferação de esplenócitos, uma glicoproteína chamada EN-SP foi isolada e identificada como o componente ativo. A EN-SP era cerca de 30,5 kDa e composta principalmente de carboidratos. Ela poderia aumentar significativamente a proliferação celular de esplenócitos murinos sem estímulos mitogênicos e possuía atividade anti-metastática mais forte que a GF-AS .
Moléculas pequenas
Parte de polissacarídeos e glicoproteínas, algumas pequenas moléculas presentes em Ciwujia também ganham certa atenção por suas habilidades em regular o sistema imunológico.
Isofraxidina
Isofraxidina, um composto ativo cumarina usado para autenticar ervas brutas ou produtos comerciais da Ciwujia, exerce um amplo espectro de efeitos farmacológicos em várias doenças como osteoartrite, câncer, distúrbio do metabolismo lipídico e doença de Alzheimer .
No aspecto imunomodulador, a isofraxidina exerce principalmente atividade anti-inflamatória. Seu profundo efeito no edema e dor amelhorante foi mediado pela inibição na produção induzida pelo LPS das citocinas pró-inflamatórias, incluindo a TNF-α e a proteína mitogen ativada fosforicamente ativada (MAPK) sinalizando as moléculas p38 e ERK1/2, a partir de macrófagos. A isofraxidina também suprimiu a expressão proteica da NF-κB, os níveis de NO e IL-6 no soro e a produção de TNF-α no fígado de camundongos com LPS. Além disso, protegeu ratos contra lesões pulmonares agudas através da inibição da expressão da proteína ciclooxigenase-2 (COX-2) e da redução da infiltração de células inflamatórias nos tecidos pulmonares. Como demonstrado em condrócitos isolados de pacientes com osteoartrite, o pré-tratamento com isofraxidina antes da IL-1β poderia inibir a expressão estimulada pela IL-1β de iNOS e COX-2 que, por sua vez, bloqueia a produção de óxido nítrico (NO) e prostaglandina E2 (PGE2). Além disso, a isofraxidina inibiu notavelmente os níveis de mRNA e a secreção de metaloproteinases de matriz (MMPs). Concluiu-se que a isofraxidina inibiu a inflamação articular induzida pela IL-1β através da regulação da sinalização NF-κB .
Syringin (Eleuterósido B)
Syringin, também chamada eleuterósido B, pertence ao grupo do composto químico lignan. É o marcador químico listado na edição 2015 da Farmacopéia da República Popular da China (CP 2015) para o ensaio de Ciwujia. Como estipulado, as amostras secas de Ciwujia devem conter não menos de 0,05% de xaroina em peso. A seringina é um dos principais compostos ativos do Ciwujia e relatado possuir atividades anti-diabéticas, anti-fadiga, neuroprotetoras e antioxidantes.
Syringin descreve o efeito imunomodulador e não imuno-estimulador. Ela inibiu a imuno-hemólise in vitro de eritrócitos ovinos revestidos de anticorpos induzidos por soro de cobaia através da supressão da C3-convertase da via clássica do complemento. Além da imunidade humoral, a imunidade celular também está envolvida na resposta imunológica solicitada pela syringin. A seringina inibiu significativamente tanto a produção de TNF-α a partir de células RAW 264,7 de macrófagos murinos estimulados por LPS como a proliferação de células T citotóxicas de uma forma dose-dependente. Recentemente, Ahmad e colegas demonstraram ainda mais que a syringin reduziu potentemente a quimiotaxia, a atividade fagocitária, a produção de ROS e NO e secreções de IL-1β, TNF-α, IL-6, PGE2 e MCP-1 de células RAW 264,7 ativadas. Com a observação de que a syringin suprimiu significativamente o isotiocianato de fluoresceína (FITC, que é capaz de desencadear reações alérgicas) – edema ouvido induzido em ratos, mas não o edema ouvido induzido pelo óleo de croton ou ácido araquidônico, especulou-se que a syringin exibia efeito antialérgico, mas não efeito anti-inflamatório .
Eleuterósido E
Eleuterósido E é outro lignano isolado de Ciwujia. Ele poderia atenuar a disfunção cognitiva induzida pela anestesia em animais idosos e melhorar a diabetes, aumentando a absorção de glicose, melhorando a resistência à insulina e regulando o metabolismo da glicose em camundongos diabéticos tipo 2. Usando o fracionamento orientado por bioatividade, também foi encontrado como o constituinte ativo da Ciwujia para combater a fadiga .
Eleuterósido E exibiu efeito imunomodulador e agiu contra a artrite induzida por colágeno (CIA), suprimindo a liberação de citocinas inflamatórias. Os ratos CIA tratados com eleuterósido E apresentaram níveis séricos significativamente mais baixos de TNF-α, IL-6 e IL-23 do que os dos ratos tratados com veículos. Seu efeito imunomodulador foi ainda confirmado em macrófagos cultivados, dos quais as produções de TNF-α e IL-6 foram profundamente suprimidas de maneira dose- e dependente do tempo. Como relatado por Kimura e Sumiyoshi, dois em cada cinco extratos aquosos de Ciwujia testados puderam recuperar a redução da atividade da NK em camundongos estressados pela natação forçada. A análise HPLC revelou que esses dois extratos continham a maior quantidade de eleuterósido E. Portanto, especulou-se que eleuterósido E era o componente imuno-estimulador ativo no extrato de Ciwujia .