Kit-ul ELISA pentru autoanticorp 21-hidroxylase (21-OH Ab) este destinat utilizării numai de către persoane profesioniste, pentru determinarea cantitativă a 21-OH Ab în serul uman. Distrugerea autoimună a cortexului suprarenal este cea mai frecventă cauză a bolii Addison, iar autoanticorpii la enzima steroid 21-hidroxilaza specifică suprarenalelor sunt markeri importanți ai autoimunității suprarenale. Acest lucru se poate întâmpla dacă boala se prezintă ca boala Addison sau ca parte a sindroamelor poliglandulare autoimune (APS) de tip I sau de tip II.
În kitul ELISA 21-OH Ab, 21-OH Ab din serurile pacienților, calibratorii și controalele sunt lăsați să interacționeze cu 21-OH acoperit pe godeurile plăcii ELISA. După o incubare de 16 – 20 de ore, probele sunt aruncate, lăsând 21-OH Ab legat de 21-OH acoperit pe godeuri. Se adaugă 21-OH-Biotină într-o a doua etapă de incubare în care, datorită capacității 21-OH Ab de a acționa divalent, se formează o punte între 21-OH imobilizat pe placă și 21-OHBiotină. Cantitatea de 21-OH-Biotin legată este apoi determinată într-o a treia etapă de incubare care implică adăugarea de streptavidină peroxidază (SA-POD), care se leagă în mod specific de biotină. Excesul de SA-POD nelegat este apoi îndepărtat prin spălare, iar adăugarea substratului de peroxidază 3,3′,5,5′-tetrametilbenzidină (TMB) duce la formarea unei culori albastre. Această reacție este oprită prin adăugarea unei soluții de oprire, ceea ce face ca conținutul godeurilor să se îngălbenească. Absorbția amestecului de reacție galbenă la 450 nm și 405 nm este apoi citită cu ajutorul unui cititor de plăci ELISA. O absorbanță mai mare indică prezența 21-OH Ab în proba de test. Citirea la 405 nm permite cuantificarea absorbțiilor ridicate. Se recomandă ca valorile sub 1 U/ml să fie măsurate la 450 nm. În cazul în care este posibilă citirea la o singură lungime de undă, se poate utiliza 405 nm. Intervalul de măsurare este de 0,3 – 100 U/ml (unități arbitrare).
.