În timpul procesului de vindecare după o fractură osoasă, calusul moale se formează adiacent locului fracturii, este înlocuit de calus dur și, în final, este remodelat la configurația osoasă originală. Deși s-a raportat că stratul cambium al periostului joacă un rol esențial în formarea calusului, ne lipsesc încă dovezi directe in vivo în acest sens. Pentru a investiga linia celulară a calusului moale, am analizat procesul de vindecare a fracturilor la șoarecii Prx1-Cre;ROSA26 reporter (R26R), Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R, Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R, Sox9-CreERT2;R26R și Sox9-LacZ cu colorare X-gal. La șoarecii Prx1-Cre;R26R, la care celulele periostului s-au colorat pentru X-gal înainte de fractură, toate celulele din calusul moale au fost X-gal pozitive, în timp ce la șoarecii Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R, celulele din periost înainte de fractură s-au colorat pentru X-gal, iar calusul moale a fost parțial compus din celule X-gal-pozitive. În schimb, la șoarecii Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R, la care osteoblastele mature din stratul cambium al periostului au fost marcate înainte de fractură, nicio celulă din calusul moale de la locul fracturii nu a fost pozitivă la X-gal. Aceste rezultate sugerează că majoritatea celulelor din calusul moale provin din progenitorii mezenchimali din periost, și nu din celulele osteoblastice mature. În mod interesant, la șoarecii Sox9-LacZ, celulele X-gal-pozitive care exprimă Sox9 au apărut în periostul adiacent locului fracturii la 3 zile după fractură. Am demonstrat acest lucru prin injectarea de tamoxifen la șoarecii Sox9-CreERT2;R26R timp de 3 zile după fractură, astfel încât aceste celule periostale care exprimă Sox9 au dat naștere la celule în calusurile moi și dure. Constatările noastre arată că celulele periostale în care expresia Sox9 este indusă imediat după fractură sunt sursa principală a condrocitelor și osteoblastelor din calusul de fractură.