Procedură
Prospectiv, participanții au fost evaluați cu instrumente de interviu structurate pentru a determina eligibilitatea pentru includerea în studiu. Chestionarul privind istoricul academic și medical (20) a fost utilizat pentru a obține informații demografice și informații privind nivelul academic atins, condițiile medicale actuale și anterioare, precum și consumul de medicamente și substanțe. Au fost excluși cei cu diabet, tulburări de abuz de substanțe sau afecțiuni psihiatrice sau neurologice diagnosticate, precum și cei care utilizează medicamente care ar putea afecta măsurile de rezultat, cum ar fi benzodiazepinele. Nivelul de afectare a memoriei a fost determinat cu ajutorul Clinical Dementia Rating (CDR), care solicită informații de la participant și de la un informator (de obicei, soțul/soția sau copilul adult) cu privire la natura și amploarea declinului cognitiv, așa cum se manifestă în activitățile zilnice la domiciliu și în comunitate (21). Au fost evaluate domeniile memorie, orientare, rezolvarea problemelor, afaceri comunitare, activități casnice și îngrijire personală, iar evaluările pentru fiecare domeniu au contribuit la o clasificare CDR globală, domeniul memorie având cea mai mare pondere. Clasificările CDR includ absența afectării, declin ușor și demență ușoară, moderată și severă. Am înrolat persoanele cu declin ușor, corespunzător deficienței cognitive ușoare, și i-am exclus pe cei cu clasificări CDR care nu indicau nicio deficiență și pe cei cu demență ușoară, moderată și severă. În plus față de clasificarea CDR globală, a fost derivat și scorul sumei de cutii. Acest scor a reprezentat suma aritmetică a clasificărilor categoriilor din cele șase domenii de funcționare și a servit ca mijloc de cuantificare a nivelului global de declin funcțional (22).
Succesul de afine sălbatice a fost preparat în comerț din afine sălbatice (lowbush) coapte și congelate (Vaccinium angustifolium Aiton) de către Van Dyk’s Health Juice Products Ltd (Caledonia, Nova Scotia, Canada) și a fost furnizat pentru această cercetare de către Wild Blueberry Association of North America, Old Town, ME, SUA. Fructele de pădure au fost decongelate, presate, filtrate, pasteurizate și apoi îmbuteliate în sticle de sticlă ambrată de un litru. Un kg de fructe de afine a produs aproximativ 735 ml de suc de o singură concentrație.
Analizele au fost efectuate pe eșantioane de suc utilizate în acest studiu. Cele mai abundente componente dizolvate în sucul de afine sălbatice au fost glucoza, fructoza și acidul malic și citric (23). Măsurarea colorimetrică a substanțelor fenolice totale din suc a indicat o concentrație de 2,38 g de echivalenți de acid galic/L (24). Principalele substanțe fenolice din suc au fost esterul acidului hidroxicinamic, acidul clorogenic, cu o concentrație de aproximativ 734 mg/L, și antocianii flavonoizi, cu o concentrație de 877 mg de echivalenți de cianidină 3-glucozidă/L de suc, pe baza analizei HPLC, așa cum este descrisă în altă parte (25). Pierderile de antociani și de alte substanțe fenolice din sucul de afine pot apărea în timpul depozitării. În timpul depozitării de aproximativ trei luni a probelor de suc, s-a determinat că pierderile de fenoli totali și de antociani au fost de 23% și, respectiv, 20%, pentru sucul care a fost depozitat la frigider în sticle de chihlimbar.
Consumul zilnic a fost menținut între 6 ml/kg și 9 ml/kg prin utilizarea unui program de dozare determinat de greutatea corporală. Indivizilor care cântăreau între 54 și 64 kg li s-au prescris 444 mL/zi, cei care cântăreau între 65 și 76 kg au consumat 532 mL/zi, iar cei care cântăreau între 77 și 91 kg au consumat 621 mL/zi. Tabelul 1 conține date privind aportul de fenoli și antociani determinat din eșantioane de suc de afine utilizate în acest studiu. Acest interval de doze a corespuns volumului utilizat în studiile la om cu suc de struguri Concord (19,26). Participanții la studiu au fost orbi în ceea ce privește suplimentul pe care l-au primit și li s-a spus că produsul studiat ar putea fi suc de struguri, suc de afine sau o băutură placebo din fructe de pădure. Sucul a fost depozitat într-o cameră frigorifică la 4 °C înainte de distribuire. Subiecții au fost instruiți să păstreze sucul la rece acasă și să ia cantitățile zilnice prescrise în doze egale, împărțite, la mesele de dimineață, de prânz și de seară. Am furnizat recipiente cu doze individuale marcate pentru fiecare subiect pentru a minimiza riscul de măsurare greșită. Perioada de intervenție a fost de 12 săptămâni. În ciuda faptului că aceasta a reprezentat un procentaj mult mai mic din durata totală de viață pentru oameni decât pentru rozătoare, ne-am așteptat ca răspunsul biologic să apară substanțial în același interval de timp, având în vedere corespondența dintre studiile anterioare pe oameni și animale. Suplimentarea cu afine pentru perioade de timp similare în experimente cu animale în vârstă a demonstrat îmbunătățiri ale performanțelor cognitive (12,14). În plus, studiile la om pe această durată cu suc de fructe de pădure au demonstrat modificări benefice ale markerilor inflamatori și ale capacității antioxidante (26).
Tabel 1
Alimentația zilnică de suc de afine în funcție de greutate, fenoli totali și antociani.
Greutate corporală, kg | Ingestia de suc de afine, ml/d | Fenoli, g acid galic eq. | Antociani, g cianidină 3-glucozidă eq. |
---|---|---|---|
54-64 | 444 | 1.056 | 0.428 |
65-76 | 532 | 1.266 | 0.512 |
77-91 | 621 | 1.478 | 0,598 |
Subiecții au primit suc îmbuteliat la vizita inițială și la o vizită intermediară în timpul săptămânii 6 de intervenție. Aderarea la protocolul de consum și efectele secundare au fost evaluate prin contacte telefonice săptămânale și prin interviu direct în timpul vizitelor intermediare și finale. Subiecții au fost instruiți să evite fructele și sucurile din fructe de pădure și extractele din fructe de pădure pe durata studiului și li s-a furnizat o listă de alimente și suplimente de evitat. Această listă includea fructe și băuturi cum ar fi afinele, murele, cireșele, strugurii, sucul de struguri, rodiile, căpșunile și vinul, printre altele.
Evaluările au fost efectuate la linia de bază înainte de tratament și în timpul ultimei săptămâni de intervenție. Rezultatele primare au fost măsurătorile funcției de memorie, inclusiv Testul de învățare verbală asociată pe perechi (V-PAL; 27) și Testul de învățare verbală California (CVLT; 28). Sarcinile asociate perechi au identificat persoanele cu neurodegenerare progresivă și au demonstrat sensibilitate la boala Alzheimer timpurie și mai avansată (29), iar V-PAL s-a dovedit a fi sensibil la schimbările de performanță în dezvoltare între femeile tinere, de vârstă mijlocie și vârstnice (30). Această sarcină solicită ca subiectul să învețe noi asocieri între cuvinte comune de una și două silabe fără legătură semantică (de exemplu, ajutor-ani). Scorul de performanță V-PAL reprezintă numărul cumulativ de răspunsuri corecte însumate pe parcursul a patru încercări de învățare și testare. CVLT este o sarcină de învățare și reamintire a listelor, utilizată pe scară largă, care a demonstrat sensibilitate la schimbările de memorie legate de vârstă, la MCI și la demență (31). Aceasta implică o listă de 16 itemi de cuvinte comune care pot fi grupate în categorii semantice. Cu toate acestea, nu există nicio solicitare de a codifica noi asocieri. Scorul de reamintire liberă a fost utilizat pentru a evalua retenția listei de cuvinte. Ambele teste de memorie verbală au fost incluse deoarece induc cerințe cognitive oarecum diferite. În timp ce V-PAL necesită formarea de asociații noi, CVLT implică dobândirea și reținerea unei liste de cuvinte individuale. Ambele se bazează pe procesarea hipocampală, deși sarcina de asociere în perechi poate fi mai intensivă din punct de vedere al resurselor și potențial mai sensibilă la efectele îmbătrânirii cognitive (32).
Forme alternative ale fiecărei sarcini de memorie au fost utilizate la vizitele inițiale și finale, astfel încât conținutul specific al itemilor de testare să nu se repete. Utilizarea formelor alternative atenuează în mod substanțial efectele de practică asociate cu modelele test-retest, în special în ceea ce privește testele de memorie (33). Cu toate acestea, este posibil ca formele alternative să nu elimine câștigul de performanță la retestare legat de efectele de practică procedurală; adică familiaritatea cu procedura de testare (34).
Moodul a fost evaluat cu Scala de depresie geriatrică (GDS; 35), un inventar de 30 de itemi conceput pentru a evalua simptomele depresiei la adulții în vârstă. Am măsurat, de asemenea, greutatea și circumferința taliei și am obținut probe de sânge la post pentru determinarea valorilor glucozei serice și insulinei de către laboratorul de biochimie al Centrului General de Cercetare Clinică (GCRC) de la Universitatea din Cincinnati.
Analizele statistice primare au inclus teste t cu eșantion dependent pentru a determina schimbarea de la momentul inițial la vizita finală în performanța memoriei, starea de spirit, antropometria corporală și parametrii metabolici. Am stabilit probabilitatea α de eroare de tip 1 la 0,05 pentru a raporta efectele semnificative din punct de vedere statistic. Având în vedere natura preliminară a acestui studiu, am raportat tendințele la α ≤ 0,10. Am calculat, de asemenea, statisticile de mărime a efectului d Cohen (36) pentru aceste analize, care sunt caracterizate ca fiind mici (0,2), medii (0,5) și mari (0,8).
Din cauza îngrijorării cu privire la câștigul de performanță cu teste repetate de memorie, am efectuat, de asemenea, analize de covarianță (ANCOVA) pentru a controla potențialele efecte de practică procedurală prin compararea performanțelor de memorie ale eșantionului de afine cu cele ale eșantionului placebo de struguri din studiul însoțitor. Aceste analize au izolat efectul intervenției folosind scorurile rezultatelor de la vizita finală ca măsură dependentă și scorul corespunzător de la vizita inițială ca măsură covariantă (37). Cohen’s f (36) reprezintă statistica mărimii efectului pentru aceste analize, care sunt mici (0,1), medii (0,25) și mari (0,40).
.